原白頭翁素衍生物對人肝癌HepG-2細胞株誘導凋亡作用的研究.pdf

1、目的：研究原白頭翁素衍生物（溴甲基呋喃酮）對人肝癌HepG-2細胞株誘導凋亡作用，并探討其機制，為研發(fā)新型的抑制腫瘤中藥提供理論及實驗依據(jù)。
　　方法：應用細胞體外傳代培養(yǎng)方法培養(yǎng)人肝癌HepG-2細胞；應用四唑鹽比色法（MTT法）檢測原白頭翁素衍生物對人肝癌HepG-2細胞株的抗增殖及細胞毒作用；應用流式細胞術檢測癌細胞周期的分布及藥物對細胞凋亡的影響；應用HE染色光學顯微鏡、倒置顯微鏡及吖啶橙/溴化乙啶雙染色熒光顯微鏡觀察藥物

2、作用前后細胞的形態(tài)學改變；應用免疫細胞化學技術檢測藥物作用前后細胞凋亡相關基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Survivin、Livin、NF-κB、Bcl-2、Bax、Fas蛋白的表達情況并探討原白頭翁素衍生物對人肝癌HepG-2細胞的作用機制。
　　結果：(1) MTT結果表明：原白頭翁素衍生物在不同濃度對人肝癌細胞有不同程度的抑制作用，并且表現(xiàn)出濃度依賴性和時間依賴性；(2)流式細胞儀檢測結果：

3、原白頭翁素衍生物5μg/ml作用于肝癌細胞24、48、72h后，可見典型的亞二倍體峰，且G1期細胞數(shù)量增多，說明細胞阻滯在G0/G1期；對照組凋亡率為0.02％，藥物作用細胞后凋亡率明顯增加，與對照組相比具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(3)顯微鏡形態(tài)觀察：通過倒置顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)實驗組細胞與對照組相比，細胞體積縮小，染色質聚集成團塊，貼壁不牢，易脫落；HE染色光學顯微鏡觀察：實驗組細胞數(shù)目減少，體積變小，胞漿深染，細胞核凝集，可見部分細

4、胞凋亡和壞死；AO/EB雙染色熒光顯微鏡觀察：早期凋亡的實驗組細胞發(fā)出黃綠色熒光，隨著藥物作用時間的延長，出現(xiàn)晚期凋亡和壞死的細胞，可見橙紅色的細胞核及碎片；(4)免疫細胞化學法結果顯示：對Survivin、Livin、NF-κB、Bcl-2蛋白的表達實驗組細胞明顯減少；對Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax及Fas蛋白的表達，實驗組細胞明顯增加，同對照組相比均有顯著性差異(P<0.05)。
　　結論