丙烯腈誘導的氧化應(yīng)激對雄性大鼠睪丸細胞NF-κB信號通路影響的研究.pdf

1、目的：探索丙烯腈（Acrylonitrile，ACN）引起雄性大鼠睪丸氧化應(yīng)激對NF-κB信號通路的影響，以及NF-κB激活后對凋亡相關(guān)基因的調(diào)節(jié)作用，為進一步研究ACN的睪丸生殖毒性機制提供依據(jù)。
　　方法：將50只SPF級健康成年SD雄性大鼠，按體重隨機分為5組，每組10只，飼養(yǎng)于甘肅中醫(yī)藥大學SPF級實驗動物中心，自由進食及飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，以12.5、25、50 mg/kg ACN、50 mg/kg ACN+300

2、mg/kg N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine，NAC）灌胃，聯(lián)合組NAC灌胃30分鐘后再灌ACN，對照組大鼠給予等體積玉米油，1次/天，6天/周，共13周。每隔3天監(jiān)測一次體重，末次采血后處死動物。（1）分離大鼠睪丸、附睪等臟器并稱重，計算臟器系數(shù)。（2）制備睪丸HE染色病理切片，光鏡下觀察睪丸組織結(jié)構(gòu)改變。（3）可見光分光光度法檢測睪丸組織中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、還原型谷胱甘肽

3、/氧化型谷胱甘肽比值（GSH/GSSG）、丙二醛（MDA）。（4）免疫熒光染色法檢測睪丸核因子-κB（NF-κB）激活及核轉(zhuǎn)移。（5）Real-Time PCR檢測睪丸Bax、Bcl-2基因表達情況。（6）Western Blot檢測睪丸p65、IKK、IκB、p-IκB、Bax、Bcl-2蛋白表達情況。
　　結(jié)果：（1）實驗開始前及染毒過程中各劑量組大鼠體重之間比較均無顯著性差異（P>0.05）。中、高劑量染毒組大鼠睪丸臟器系數(shù)

4、與對照組比較顯著降低（P<0.05）。各劑量組間大鼠附睪臟器系數(shù)比較無顯著性差異（P>0.05）。（2）光鏡下可見，中劑量染毒組大鼠睪丸曲細精管密集程度較低，初級精母細胞染色程度豐富、數(shù)量較多，睪丸間質(zhì)細胞較少，輪廓較清晰。高劑量染毒組大鼠睪丸曲細精管排列稀疏，密集程度低，管徑變小，各級生精細胞排列不規(guī)則，數(shù)量少，睪丸間質(zhì)稀疏、間質(zhì)細胞數(shù)量少、輪廓不清晰。（3）低、高劑量染毒組大鼠睪丸GSH/GSSG比值、GSH-Px酶活性與對照組比較

5、顯著降低（P<0.05）。中、高劑量染毒組大鼠睪丸 MDA含量與對照組比較顯著升高（P<0.05）。NAC預(yù)處理后，高ACN+NAC組大鼠睪丸MDA含量與高ACN組比較顯著降低（P<0.05）；高ACN+NAC組大鼠睪丸GSH/GSSG比值與高ACN組比較顯著升高（P<0.05）；（4）免疫熒光結(jié)果顯示，高ACN組大鼠睪丸p65蛋白表達升高，轉(zhuǎn)移入細胞核p65升高，表明高ACN組大鼠睪丸NF-κB被激活。用NAC提前處理后p65蛋白表達

6、及核轉(zhuǎn)移顯著減少。Western Blot結(jié)果示，高劑量染毒組大鼠睪丸IKK-α/β蛋白、p65蛋白、p-IκB蛋白表達與對照組比較顯著升高（P<0.05），IκB蛋白表達與對照組比較顯著降低（P<0.05）。高 ACN+NAC聯(lián)合染毒組大鼠睪丸 IKK-α/β蛋白、p65蛋白、p-IκB蛋白表達與高ACN組比較顯著降低（P<0.05），IκB蛋白表達與高ACN組比較顯著升高（P<0.05）。（5）RT-PCR和Western Blot

7、結(jié)果示，高劑量染毒組大鼠睪丸 Bax mRNA及蛋白表達水平與對照組比較顯著升高（P<0.05）。高劑量染毒組大鼠睪丸 Bcl-2 mRNA及蛋白表達水平與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。高ACN+NAC聯(lián)合染毒組大鼠睪丸Bax mRNA及蛋白表達水平與高ACN組比較顯著降低（P<0.05）。
　　結(jié)論：（1）ACN亞慢性染毒可引起大鼠睪丸發(fā)生病理性損傷。（2）ACN引起的睪丸損傷可能與氧化應(yīng)激有關(guān)。（3）ACN誘導睪