丙烯腈對(duì)大鼠T細(xì)胞亞群、Toll樣受體4及氧化應(yīng)激水平的影響.pdf

1、目的:探討丙烯腈（acrylonitrile，ACN）亞慢性中毒對(duì)大鼠T細(xì)胞亞群、Toll樣受體4(toll-like receptor4，TLR4)水平及相關(guān)細(xì)胞因子的影響，了解Nrf-2、ROS、HSP70 mRNA的變化對(duì)氧化應(yīng)激和免疫功能的影響。
　　方法:SD大鼠隨機(jī)分成雌雄各4組，每組8只，分別以0、5、10、20mg/kg劑量丙烯腈灌胃染毒，每日1次，每周5次，連續(xù)染毒13周。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析大鼠血液和脾臟T淋巴細(xì)

2、胞亞群(CD3、CD4、CD8)的變化;采用實(shí)時(shí)熒光定量多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)分析脾臟Nrf-2、HSP70、ROS、TLR4、IL-1β和TNF-α mRNA表達(dá)水平的變化;應(yīng)用蛋白免疫印跡法(Western blot)分析大鼠脾臟組織TLR4蛋白表達(dá)水平的變化。采用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料采用(X)±s描述，多組均數(shù)比較采用單因素方差分析(One-way ANOVA)。
　　結(jié)果:①與對(duì)照組比較，染毒

3、13周后，雌雄大鼠體重均成下降趨勢(shì)，其中雌鼠10、20mg/kg組與雄鼠20mg/kg組體重明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。脾臟臟體比的變化呈上升趨勢(shì)，雌鼠5、10、20mg/kg組與雄鼠20mg/kg組脾臟臟體比明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。通過(guò)比較對(duì)照組與劑量組的體重與脾臟比發(fā)現(xiàn)雌鼠較雄鼠敏感，雌鼠在染毒劑量為10mg/kg時(shí)體重明顯降低，而雄鼠無(wú)明顯變化。而雌鼠脾臟臟體比從5mg/kg開(kāi)始有明顯升高趨勢(shì)，

4、而雄性大鼠在劑量為20mg/kg的作用下脾臟臟體比才有明顯升高趨勢(shì);病理結(jié)果顯示:20mg/kg組大鼠主要病變?yōu)楦渭?xì)胞濁腫及水樣變性;肺細(xì)支氣管炎、血管周?chē)?、代償性肺氣腫;大腦海馬部海馬部神經(jīng)元空泡變性、腦水腫，并見(jiàn)部分玻璃樣小體散在分布，膠質(zhì)細(xì)胞局灶性增生;睪丸曲細(xì)精管間隙增寬，生精細(xì)胞減少。
　?、谘篢細(xì)胞亞群分析發(fā)現(xiàn):與對(duì)照組相比雌鼠20mg/kg組CD3、CD4明顯降低，5、10、20mg/kg組CD8細(xì)胞比例明顯升高

5、，CD4/CD8明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01);雄鼠5mg/kg組CD3，20mg/kg組CD4和CD4/CD8明顯降低，CD8細(xì)胞比例明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）;脾臟T細(xì)胞亞群分析發(fā)現(xiàn)，雌鼠20mg/kg組CD4和CD4/CD8明顯降低，CD8細(xì)胞比例明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）;雄鼠20mg/kg組CD3、CD8明顯升高，20mg/kg組CD4和10

6、、20mg/kg組CD4/CD8明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01);
　?、叟c對(duì)照組比較，雌雄大鼠TLR4 mRNA及蛋白表達(dá)均呈下降趨勢(shì)，雄鼠5、10、20mg/kg組和雌鼠10 mg/kg組TLR4 mRNA表達(dá)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01);雌鼠5mg/kg組和雄鼠20 mg/kg組TLR4蛋白表達(dá)水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;
　?、芘c對(duì)照組比較，雌鼠

7、5、10、20mg/kg組和雄鼠5、10mg/kg組IL-1β mRNA表達(dá)量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）;雌鼠10、20mg/kg組和雄鼠5、10mg/kg組TNF-α mRNA表達(dá)水平明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　⑤與對(duì)照組比較，雌雄大鼠Nrf-2 mRNA表達(dá)呈下降趨勢(shì)，雌雄大鼠5、10、20mg/kg組Nrf-2 mRNA表達(dá)均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜

8、0.01)。雌鼠5mg/kg組降低最為明顯，雄鼠20mg/kg組降低最為明顯，丙烯腈對(duì)大鼠Nrf-2的影響，有明顯的性別差異;雌雄大鼠ROS mRNA雌鼠表達(dá)呈下降趨勢(shì)，10、20mg/kg組與雄鼠5、10、20mg/kg組ROS mRNA表達(dá)明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。雌鼠ROS mRNA的表達(dá)量隨劑量增加而降低，而雄鼠呈現(xiàn)出雙峰反應(yīng)形式，5mg/kg與20mg/kg組ROS mRNA的表達(dá)量降低較10mg/kg組明

9、顯;與對(duì)照組比較，雌雄大鼠HSP70 mRNA表達(dá)呈下降趨勢(shì)，雌鼠與雄鼠5、10、20mg/kg組HSP70 mRNA表達(dá)明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。雌雄大鼠HSP70 mRNA表達(dá)降低均以10mg/kg組最為明顯。
　　結(jié)論:丙烯腈可影響動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育，在長(zhǎng)期亞慢性染毒作用下，具有臟器毒性，可引起血液及脾臟T淋巴細(xì)胞亞群CD3、CD4、CD8及CD4和CD8的比值的變化，同時(shí)也明顯影響TLR4 m