ATM基因沉默對(duì)大腸癌細(xì)胞放射敏感性影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過(guò)大腸癌體外細(xì)胞模型，利用RNA干擾技術(shù)，探討ATM基因沉默是否對(duì)大腸癌HT29細(xì)胞的放射敏感性有影響。
　　方法：設(shè)計(jì)并構(gòu)建ATM基因小分子干擾RNA(Small interfering RNA，siRNA)真核表達(dá)質(zhì)粒pSilencer2.1-ATM，并轉(zhuǎn)染人大腸癌HT29細(xì)胞株作為陽(yáng)性組;ATM基因RNAi寡聚脫氧核糖核酸序列隨機(jī)重新排列后構(gòu)建非特異性siRNA，并轉(zhuǎn)染pSilencer2.1-nonspecific

2、質(zhì)粒作為陰性組，未轉(zhuǎn)染為對(duì)照組。各組分別采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)檢測(cè)各組ATM基因的mRNA含量，蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blot，WB)檢測(cè)每組ATM基因mRNA表達(dá)的蛋白質(zhì)含量，各組細(xì)胞經(jīng)8GyX線照射后，分成兩部分，分別繼續(xù)培養(yǎng)24 h、48 h，然后采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)(24 h、48h)的陽(yáng)性組、陰

3、性組以及對(duì)照組的細(xì)胞周期分布和細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果：ATM基因siRNA真核重組表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建后成功轉(zhuǎn)染大腸癌HT29細(xì)胞。RT-PCR檢測(cè)證實(shí)陽(yáng)性組ATM基因的mRNA含量明顯下降;Western blot結(jié)果證實(shí)陽(yáng)性組細(xì)胞ATM基因所表達(dá)蛋白量明顯減少。經(jīng)X線照射后24h，陽(yáng)性組G1+G0期、G2+M期細(xì)胞比例較對(duì)照組均減少(t=-11.59，P＜0.001;t=-4.30，P＜0.001)，但陰性組與對(duì)照組相比無(wú)明顯差別(

4、t=0.02，P=0.98;t=-0.03，P=0.97);照射48h后，G1+G0期、G2+M期細(xì)胞比例同樣較對(duì)照組減少(t=-9.91，P＜0.001;t=-4.94，P＜0.001)，陰性組與對(duì)照組同樣無(wú)明顯差別(t=0.08，P=0.94; t=0.09，P=0.93);照射后24、48 h陽(yáng)性組細(xì)胞凋亡率均高于對(duì)照組(t=21.15，P＜0.001;t=32.94，P＜0.001)，陰性組與對(duì)照組相比無(wú)明顯差別(t=1.56，