PGDS-DP通路參與鋁鹽致原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元損傷機制初步探討.pdf

1、目的:
　?。?）觀察鋁負荷原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元 PGDS-DP通路變化特征；
　　（2）觀察 PGDS-DP通路干預對鋁負荷原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元的影響。
　　方法:
　?。?）鋁負荷原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元PGDS-DP通路變化情況
　　選取孕期18d左右的SD大鼠，離體培養(yǎng)胎鼠海馬神經(jīng)元，d7進行NSE免疫組化鑒定并給予麥芽酚鋁（Al(malt)3，終濃度100μM）建立鋁負荷致原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元

2、損傷模型（空白對照組給予PBS，對照組給予300μM麥芽酚）。MTT法測定海馬神經(jīng)元存活率；LDH法測定海馬神經(jīng)元乳酸脫氫酶漏出率；HE染色法觀察海馬神經(jīng)元病理形態(tài)學變化；ELISA試劑盒檢測海馬神經(jīng)元PGD2含量；RT-PCR檢測海馬神經(jīng)元L-PGDS、DP1、DP2 mRNA表達；Western-Blotting檢測海馬神經(jīng)元L-PGDS、DP1、DP2蛋白表達。
　?。?）PGDS-DP通路干預對鋁負荷原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元

3、的作用觀察
　　選取孕期18d左右的SD大鼠，離體培養(yǎng)胎鼠海馬神經(jīng)元，d7給予 Al(malt)3建立鋁負荷致原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元損傷模型，并給予DP1激動劑BW245C、DP1拮抗劑BWA868C、DP2激動劑DK-PGD2、DP2拮抗劑CAY10471進行干預。MTT法測定海馬神經(jīng)元存活率；LDH法測定海馬神經(jīng)元乳酸脫氫酶漏出率；HE染色法觀察海馬神經(jīng)元病理形態(tài)學變化；Ca2+熒光探針Fluo-3/AM檢測海馬神經(jīng)元胞內(nèi)Ca

4、2+水平。
　　結果：
　?。?）培養(yǎng)至7d的海馬神經(jīng)元聚集成團，有較強折光率；胞體呈橢圓形或錐體形，突起相互交織成稠密的網(wǎng)狀結構。NSE鑒定神經(jīng)元純度超過95％。與空白對照組相比，鋁負荷模型組神經(jīng)元細胞數(shù)目明顯減少，突起萎縮甚至消失，部分細胞核固縮；MTT值明顯降低；LDH漏出率明顯升高；PGD2含量明顯升高；L-PGDS、DP1 mRNA和蛋白表達明顯升高；DP2 mRNA和蛋白表達明顯降低。
　　（2）與空白對照

5、組相比，鋁負荷模型組神經(jīng)元Ca2+熒光強度明顯增強。與鋁負荷模型組相比，DP1激動劑BW245C干預組海馬神經(jīng)元細胞數(shù)目明顯增多，部分突起仍相互交織成網(wǎng)狀；MTT值明顯升高；LDH漏出率明顯降低；Ca2+熒光強度明顯減弱。DP1拮抗劑BWA868C干預組海馬神經(jīng)元胞體破裂，無完整細胞結構；MTT值明顯降低；LDH漏出率明顯升高；盡管Ca2+熒光強度有增強趨勢，但無顯著性。 DP2激動劑 DK-PGD2干預組海馬神經(jīng)細胞幾乎全部核固縮、裂

6、解；MTT值明顯降低；LDH漏出率明顯升高；Ca2+熒光強度有增強趨勢，但無顯著性。DP2拮抗劑CAY10471干預組海馬神經(jīng)細胞胞體、胞核明顯，裂解細胞明顯減少；MTT值明顯升高；LDH漏出率明顯降低；Ca2+熒光強度明顯降低。
　　結論：
　?。?）鋁負荷原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元PGD2含量增加，L-PGDS、DP1表達升高，DP2表達降低。
　?。?）DP1表達與激活可減弱神經(jīng)元對鋁鹽損傷的易感性，DP2表達與激活