草魚(Ctenopharyngodon idella)膠原凝集素(collectin)和轉鐵蛋白(transferrin)功能的初步分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究從已構建的草魚(Ctenopharyngodon idella)肝腎cDNA文庫中篩選到1個克隆,經測序和特征分析確定為草魚膠原凝集素基因(GQ141696)。草魚膠原凝集素全長cDNA為1128 bp,其中5’非編碼區(qū)229 bp,3’非翻譯區(qū)104 bp,最大開放閱讀框為795 bp,編碼1個264 aa組成的蛋白質。系統(tǒng)進化分析表明草魚膠原凝集素與斑馬魚的親緣關系最近。根據草魚膠原凝集素序列特征,克隆了包含糖基識別域(CRD

2、)的cDNA,并進行原核表達、純化獲得其重組蛋白PCRD。進行PcRD與6種細菌的凝集和糖抑制實驗,結果表明半乳糖、葡萄糖、甘露糖和麥芽糖4種糖都會使PCRD與嗜水氣單胞菌的凝集明顯下降甚至極大地干擾凝集。麥芽糖使金黃色葡萄球菌的凝集明顯下降,而肽聚糖和甘露糖會使凝集受到抑制。此外,PcRD的凝集反應不依賴Ca2+。
　　 轉鐵蛋白(transferrin,Tf)是一種非血紅素結合鐵的β-球蛋白,其N-端和C-端的2個同源結構域

3、由一個短鉸鏈區(qū)鏈接,草魚轉鐵蛋白每個結構域含有4個鐵離子結合位點,分別結合4個Fe3+。轉鐵蛋白功能廣泛,不僅參與機體鐵離子的運輸和代謝,還在細胞呼吸、細胞生長和增殖中起重要作用,而且它具有抗菌殺菌功能,與機體的先天性免疫有關。為了解魚類轉鐵蛋白與鐵離子結合的分子機理以及N-端和C-端的2個同源結構域的功能,本文根據實驗室前期克隆的草魚轉鐵蛋白基因(EU790874)全長cDNA序列特征,分別克隆了包含這2個結構域的cDNA,并進行原核

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