結腸癌細胞VCR耐藥株的建立及相關miRNA篩選.pdf

1、背景：腫瘤細胞耐藥是導致腫瘤化學治療失敗的重要原因，長春新堿(vincristine，VCR)是一類廣泛用于腫瘤治療的化學藥物。但是，長期使用可使腫瘤細胞對VCR產生耐藥性，腫瘤耐藥機制仍不清楚。本研究探討與結腸癌耐藥的微小RNA(microRNA，miRNA)，旨在揭示腫瘤耐藥機制及為腫瘤細胞耐藥逆轉提供基礎。
　　目的：建立長春新堿耐藥結腸癌細胞模型，篩選與結腸癌細胞VCR耐藥相關的miRNA。
　　方法：
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2、.培養(yǎng)結腸癌HCT-8細胞，采用VCR梯度誘導，建立HCT-8/VCR耐藥細胞株。
　　2.采用全基因組篩選的研究策略，運用HiSeq2500測序技術和生物信息學的方法，檢測和分析耐藥HCT-8/VCR細胞的和非耐藥的HCT-8細胞差異性表達的miRNAs，構建其miRNA的差異表達譜。
　　3.針對鑒定的差異miRNA，通過靶基因預測軟件進行靶位點確認，通過靶基因所在基因的GO進行功能注釋。
　　結果：
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3、.利用濃度梯度的VCR建立了VCR耐藥的結腸癌細胞HCT-8/VCR，HCT-g/VCR細胞在2×103ng/mLVCR中生長良好。
　　2.共進行了1651種miRNA測序，其中有差異的有48種miRNA，與非耐藥的結腸癌HCT-8細胞相比，24種miRNA差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05），其中有17種miRNA表達上調(P＜0.05）。hsa-miR-675-3p表達量上調最高，高達7.497681倍，其次是hsa-miR-

4、100-3p, hsa-miR-125b-1-3p, hsa-miR-582-5p, hsa-miR-3141, chr15_10055,hsa-miR-582-5p，hsa-miR-582-3p，hsa-miR-3687。7種miRNA表達下調(P＜0.05），下調最高的是hsa-miR-146a-5p，下調7.75199倍，其次是hsa-miR-1247-3p，hsa-miR-181a-3p，hsa-miR-1247-5p。