大鼠成骨細(xì)胞膜片在不同鈦表面的骨再生效應(yīng)研究.pdf

1、目的：
　　初步探討大鼠成骨細(xì)胞膜片在不同鈦表面的骨再生效應(yīng)。
　　方法：
　　原代培養(yǎng)大鼠成骨細(xì)胞，通過(guò)形態(tài)學(xué)、HE染色、堿性磷酸酶染色和茜素紅染色鑒定成骨細(xì)胞；在不同表面處理的鈦片上構(gòu)建大鼠成骨細(xì)胞膜片，實(shí)驗(yàn)分組：噴砂酸蝕組、陽(yáng)極氧化組和光滑組，分別于第一周和第二周，采用物理刮取法獲取成骨細(xì)胞膜片；通過(guò)倒置相差顯微鏡、掃描電鏡對(duì)細(xì)胞膜片進(jìn)行觀察；HE染色測(cè)量細(xì)胞膜片的厚度；MTT法測(cè)量細(xì)胞膜片的細(xì)胞密度；微量酶標(biāo)法

2、檢測(cè)細(xì)胞膜片堿性磷酸酶（ALP）活性；采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)成骨細(xì)胞膜片Runx相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子-2（Runx2）mRNA、骨涎蛋白（BSP）mRNA的表達(dá)，并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行相應(yīng)的統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：
　　倒置相差顯微鏡下觀察原代培養(yǎng)細(xì)胞，細(xì)胞符合成骨細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征，HE染色、堿性磷酸酶染色和茜素紅染色鑒定結(jié)果符合成骨細(xì)胞特性。光滑組成骨細(xì)胞膜片的厚度測(cè)量：與第一周相比，第二周細(xì)胞膜片厚度明顯增加（P<0.05），提示細(xì)胞膜片

3、在鈦表面增殖生長(zhǎng)。MTT法檢測(cè)：噴砂酸蝕組和陽(yáng)極氧化組的細(xì)胞增殖率明顯高于光滑組，細(xì)胞增殖率隨時(shí)間增加而上調(diào)；噴砂-酸蝕組與陽(yáng)極氧化組之間無(wú)差異。堿性磷酸酶（ALP）檢測(cè)：各時(shí)間點(diǎn)噴砂酸蝕組和陽(yáng)極氧化組堿性磷酸酶活性明顯高于光滑組（P<0.05）；各組第二周較第一周堿性磷酸酶活性降低(P<0.05)；噴砂酸蝕組與陽(yáng)極氧化組間無(wú)明顯差異。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)：組間比較時(shí)，相對(duì)于光滑組，陽(yáng)極氧化組Runx2 mRNA的表達(dá)量明顯上調(diào)(第一

4、周、第二周P<0.05),噴砂酸蝕組Runx2 mRNA的表達(dá)量比光滑組增加最明顯（第一周P<0.05，第二周P<0.05）。第一周和第二周噴砂酸蝕組和陽(yáng)極氧化組BSP mRNA表達(dá)量均高于光滑組,兩周均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中第二周噴砂酸蝕組BSP mRNA表達(dá)量比光滑組顯著增加（P<0.05）。噴砂酸蝕組與陽(yáng)極氧化組間無(wú)差異。組內(nèi)比較時(shí)，各組細(xì)胞膜片第二周Runx2 mRNA的表達(dá)量比第一周明顯下調(diào)（P<0.05）；與第一周比較，第二周