β-淀粉樣蛋白25-35誘導HT22細胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激及二苯乙烯苷的保護作用.pdf

1、目的：阿爾茨海默病(AD)是一種老年人常見的癡呆類型，以進行性認知功能障礙和行為異常為特征的神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變。腦組織里出現(xiàn)大量老年斑以及神經(jīng)原纖維纏結(jié)是AD主要的病理學特征。其中，β-淀粉樣蛋白(β-amyloid peptide，Aβ)作為老年斑的主要成分，具有非常嚴重的神經(jīng)毒性，所以影響著AD的形成和發(fā)展。有研究顯示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激的三個通路蛋白表達狀態(tài)變化，將導致細胞的凋亡，進而引發(fā)疾病。本實驗通過建立AD細胞模型，研究Aβ25-35

2、誘導HT22細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)生應激時，介導內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激的三個通路蛋白表達水平的變化及二苯乙烯苷（Tetrahydroxy stilbene glycoside,TSG）對其的保護作用。
　　方法：將HT22細胞分為未分化組和分化組，未分化組加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)48小時，分化組為完全培養(yǎng)基貼壁生長24小時后加入分化液（Neurobasal培養(yǎng)基和N2添加劑）培養(yǎng)24小時后，Western blot檢測兩組細胞的ATF6、PERK、IRE1蛋

3、白表達量的變化。不同濃度的Aβ25-35分別作用于兩組HT22細胞24小時，用MTT測定細胞活力變化。確定最佳AD細胞模型，將分化型HT22細胞分為對照組、Aβ處理組和Aβ＋TSG組，最佳抑制濃度的Aβ25-35作用于HT22細胞24小時，加入TSG(0、100、300、500μmol/L)用MTT測定細胞活力變化，免疫細胞熒光檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激三個通路蛋白的表達位置，及Western blot檢測ATF6、PERK、IRE1蛋白表達量的變

4、化。
　　結(jié)果：⑴ATF6、PERK、IRE1蛋白在未分化組的表達量明顯高于分化組的表達量。Aβ25-35對未分化組細胞雖有損傷作用，但各組間無明顯差異，且無劑量依賴關(guān)系。Aβ25-35可以誘導分化組HT22細胞發(fā)生損傷，且呈劑量依賴關(guān)系，Aβ25-35(20μmol/L、40μmol/L)作用于分化組HT22細胞24小時，細胞存活率分別為66％、60%，AD模型最佳。⑵Aβ25-35可以誘導HT22細胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激，且這種內(nèi)質(zhì)