PDGF-CCK轉基因小鼠的建立及CCK對攝食行為影響的初步研究.pdf

1、膽囊收縮素(Cholecystokinin，CCK)是一種廣泛存在于胃腸道和中樞神經系統(tǒng)的腦腸肽，具有多種生理學功能。腸道中的CCK除了促進膽囊收縮以外，還可以調節(jié)胰酶的分泌和胰腺的生長、胃腸蠕動，抑制胃酸分泌，參與飽腹信號的傳導。作為在腦內含量最豐富的腦腸肽之一，CCK在神經系統(tǒng)內參與了多種生理過程并發(fā)揮著重要的功能，如抑制進食、抗焦慮、鎮(zhèn)痛、調節(jié)血壓和增強記憶等。但是，迄今為止人們對CCK在腦中發(fā)揮作用的具體機制還不清楚；對CCK在

2、腦中的許多功能還存在著很大的爭論，如CCK是否能通過中樞神經系統(tǒng)對動物的飲食實現(xiàn)長期的調節(jié)?CCK是否具有神經保護作用并能增強記憶?CCK與某些神經精神疾病(如Parkinson′s disease、精神分裂癥)的關系也是研究人員力在解決的問題。目前，研究人員對CCK多肽及其受體進行了多方面研究，仍沒有建立CCK轉基因的小鼠。 為了更好的研究CCK在中樞神經系統(tǒng)的功能，本實驗采用神經特異性啟動子PDGF，建立了在神經系統(tǒng)特異性

3、表達CCK的轉基因小鼠并對CCK對小鼠攝食行為和體重的影響進行了初步探討。實驗分為3部分：轉基因表達載體的構建；表達載體在神經母細胞瘤細胞中的表達：轉基因小鼠的鑒定及CCK對飲食調節(jié)的初步探討。 擴增CCK cDNA編碼區(qū)，克隆到含有神經特異性啟動子PDGF的載體里。用表達質粒瞬時轉染人神經母細胞瘤SHSY-5Y細胞，Western Blot顯示構建質粒在體外表達。酶切含有PDGF啟動子、CCK目的片斷、PolyA的片斷進行顯

4、微注射。篩選F<,0>代轉基因陽性鼠，13只小鼠中3只為陽性。Western Blot顯示CCK在轉基因鼠腦、小腸組織特異性表達。比較3個首建鼠后代與野生鼠腦組織CCK表達量的差異，3個Founder鼠腦中外源CCK都有表達。其中，在兩只(8號、12號)腦中，表達量增加約1倍，在一只(20號)腦內表達量增加約2倍。 將動物分為轉基因組和陰性對照組，并給與正常飲食和高脂飲食。初步動物實驗結果經t檢驗顯示：正常飲食情況下，轉基因雄

5、鼠體重低于陰性對照鼠8.02％(27.61±1.67g vs 30.02±1.04g，P<0.05)，轉基因雌鼠低于對照鼠2.36％(21.48±0.41g vs 22.00±1.02g，P=0.364)；高脂飲食情況下，轉基因雌鼠體重低于陰性對照鼠6.55％(21.83±0.54g vs 23.36±1.09g，P<0.05)，轉基因雄鼠低于對照鼠5.39％(27.56±2.04g vs 29.13±1.47g，P=0.144)。對各