嗜水氣單胞菌中聚羥基脂肪酸酯包涵體蛋白PhaP的研究.pdf

1、本論文研究了采用PCR方法克隆得到的A.hydrophila 4AK4的PHA合成相關(guān)基因，揭示其phaP-phaC-phaJ的PHA合成操縱子的排列方式，其中phaP編碼一種顆粒相關(guān)蛋白，phaC編碼PHA合酶和phaJ編碼R-特異的烯脂酰輔酶A水合酶。分析表明嗜水氣單胞菌的PHA合成相關(guān)基因與豚鼠氣單胞菌(Aeromonas caviae)的PHA合成相關(guān)基因區(qū)域有很高的同源性。 在嗜水氣單胞菌中分別過(guò)量表達(dá)phaP，pha

2、C和phaJ基因，結(jié)果驗(yàn)證了克隆得到的嗜水氣單胞菌PHA合成相關(guān)基因的功能，并且發(fā)現(xiàn)過(guò)量表達(dá)phaP或phaC都能提高其合成的PHA中3HHx單體的比例，同時(shí)能夠降低合成的PHA的分子量，而過(guò)表達(dá)phaJ基因卻沒(méi)有這些作用；包涵體蛋白PhaP還能使嗜水氣單胞菌積累的PHA顆粒變小，數(shù)目增多。 在野生型和過(guò)量表達(dá)phaP基因的重組型A.hydrophila 4AK4中研究包涵體蛋白PhaP和PHA合酶PhaC二者的關(guān)系，結(jié)果表明這

3、兩個(gè)蛋白都位于PHA顆粒表面，PhaP蛋白是顆粒表面蛋白的主要組成部分，通過(guò)定量PCR對(duì)PHA合酶PhaC的定量研究，發(fā)現(xiàn)PhaP在轉(zhuǎn)錄水平上可以上調(diào)PhaC的表達(dá)量。 為了進(jìn)一步了解PhaP在PHA合成中的調(diào)機(jī)理，在嗜水氣單胞菌和大腸桿菌中對(duì)A.hydrophila 4AK4和Wautersia eutropha H16的PhaP功能進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)二者蛋白具有相似的調(diào)節(jié)功能；又對(duì)兩個(gè)PhaP蛋白結(jié)構(gòu)分析，結(jié)果表明二者蛋白有著