抗原ELISA檢測(cè)試劑盒和膠體金試紙條用于禽白血病病毒檢測(cè)時(shí)的比較研究.pdf

1、禽白血病病毒（Avian Leukosis Virus，ALV）自1908年首次被分離并報(bào)道以來(lái)，隨后的幾十年里世界各地都有該病的爆發(fā)與流行，這說(shuō)明禽白血病已廣泛分布于世界各地，由ALV感染所引發(fā)的臨床和亞臨床感染，給養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)了較大的經(jīng)濟(jì)損失，也引起了世界各地養(yǎng)禽業(yè)的足夠重視。從上世紀(jì)70代以來(lái)，世界各大國(guó)際跨國(guó)育種公司都在雞群中采取了一系列清除和凈化ALV的措施，現(xiàn)如今，各發(fā)達(dá)國(guó)家的養(yǎng)禽業(yè)已經(jīng)基本消滅和控制住了經(jīng)典的外源性禽白血病病

2、毒在規(guī)?；B(yǎng)雞場(chǎng)的流行，但在我國(guó)雞群中，ALV感染仍十分普遍。隨著ALV的診斷鑒別方法越來(lái)越多，國(guó)內(nèi)養(yǎng)禽業(yè)對(duì)禽白血病病毒不同鑒別方法的關(guān)注度越來(lái)越高。那么，選擇靈敏度高和特異性強(qiáng)的檢測(cè)方法無(wú)疑可以讓各原種雞場(chǎng)和商品代雞場(chǎng)有效的防控禽白血病，還能減少不必要的損失。
　　1.不同ELISA試劑盒和膠體金試紙條對(duì)細(xì)胞上清中P27的檢測(cè)比較
　　為比較不同禽白血病病毒（ALV）抗原ELISA檢測(cè)試劑盒和膠體金試紙條的靈敏度，本研究將

3、A、B、J三種不同ALV亞群分別以50TCID50、100TCID50、500TCID501000TCID50、10000TCID50五種劑量接種培養(yǎng)于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的DF-1細(xì)胞上，2h后換含2％胎牛血清的細(xì)胞維持液，接種后第2-8天每天收取細(xì)胞上清并補(bǔ)充等量的DMEM，每份上清用三種不同的抗原ELISA檢測(cè)試劑盒（A、B、C）和兩種膠體金試紙條（D、E）按照各自的說(shuō)明書(shū)同時(shí)檢測(cè)。結(jié)果顯示，三種亞群的五種劑量分別應(yīng)用A、B、C三種ELIS

4、A檢測(cè)試劑盒靈敏度基本一致，但在針對(duì)三種亞群病毒接種的的個(gè)別劑量個(gè)別天數(shù)時(shí)，ELISA-B試劑盒的靈敏度要略高于A和C；兩種膠體金試紙條的抗原檢出時(shí)間檢測(cè)結(jié)果完全一致，但其靈敏度均要比ELISA檢測(cè)試劑盒的低，在接種低劑量的病毒時(shí)，膠體金試紙條的抗原檢出時(shí)間要比ELISA試劑盒延后1-2天，但在接種高劑量的病毒或者到了低劑量病毒復(fù)制增殖的后期時(shí)，膠體金試紙條能夠更快速的做出判定，相比試劑盒節(jié)省了不少時(shí)間。
　　2.不同ELISA試

5、劑盒和膠體金試紙條對(duì)蛋清中P27的檢測(cè)比較
　　在本研究中，應(yīng)用卵黃囊接種對(duì)90只SPF種雞分別接種了A、B、J三個(gè)亞群的ALV病毒，每隔4周對(duì)雞采血做病毒分離，選擇持續(xù)產(chǎn)生病毒血癥的母雞，待其生長(zhǎng)至產(chǎn)蛋期收集種蛋，收集的蛋與雞編號(hào)一一對(duì)應(yīng)，用抗原ELISA檢測(cè)試劑盒A、B和膠體金試紙條D、E對(duì)60枚種蛋蛋清進(jìn)行了檢測(cè)，并將檢測(cè)結(jié)果與病毒分離的結(jié)果相對(duì)比，結(jié)果顯示膠體金試紙條與病毒分離的吻合率不超過(guò)60%，而檢測(cè)試劑盒的吻合率最高