Dicer對小鼠白色脂肪組織棕色化的影響及其機制研究.pdf

1、目的：觀察Dicer基因脂肪組織特異性敲除后小鼠內(nèi)臟脂肪占體重的比例變化及內(nèi)臟脂肪棕色化程度,再誘導 Dicer基因敲除的內(nèi)臟脂肪前體細胞向棕色脂肪細胞分化,探索其可能的分子調(diào)控機制,從而闡述Dicer基因與小鼠內(nèi)臟白色脂肪棕色化的關系。
　　方法：1.轉基因小鼠的構建：實驗中，我們將Dicerflox/flox小鼠與Adiponectin-Cre小鼠雜交，從而得到了Adiponectin-Cre；Dicerflox/flox脂肪

2、組織特異性Dicer基因敲除小鼠。記錄小鼠每周體重增長及食物攝入重量。
　　2.轉基因小鼠體內(nèi)試驗:測定6周成年小鼠的體重,對實驗組和對照小鼠進行糖耐量試驗。提取小鼠內(nèi)臟脂肪組織稱重，然后4％多聚甲醛固定，石蠟包埋切片后HE染色，比較實驗組和對照組脂肪細胞的大小。抽提內(nèi)臟白色脂肪RNA,檢測組織中UCP1（解耦聯(lián)蛋白-1）基因的表達量。
　　3. Dicer對內(nèi)臟脂肪前體細胞誘導分化成棕色脂肪細胞的調(diào)控作用：
　　從D

3、icerflox/flox小鼠內(nèi)臟脂肪組織內(nèi)提取前體細胞,通過感染LV-Cre-GFP病毒和LV-GFP病毒,模擬基因敲除后向棕色脂肪細胞分化的過程。通過油紅染色鑒定脂肪細胞的形成和觀察脂肪細胞的形態(tài)；
　　3.應用實時熒光定量PCR（Real-timeqPCR）技術檢測棕色脂肪細胞形成相關基因、線粒體標志基因及產(chǎn)熱基因表達的變化；應用Western Blot技術檢測細胞解偶聯(lián)蛋白UCP1的表達差異。以此來探索Dicer基因?qū)π∈?/p>

4、白色脂肪棕色化影響的機制。
　　結果：
　　1.與對照組小鼠相比，Dicer基因脂肪組織特異性敲除小鼠內(nèi)臟脂肪含量減少(p<0.005)，小鼠糖代謝的能力也增強，兩組結果具有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。
　　2.實驗組小鼠內(nèi)臟脂肪組織中脂肪細胞體積比對照組小鼠中的體積減?。╬<0.01），其 UCP1基因表達增加，兩組結果具有統(tǒng)計學差異（p<0.005）。
　　3. Lentivirus-Cre-GFP病毒感染組

5、細胞經(jīng)棕色脂肪誘導液誘導成成熟的脂肪細胞后在形態(tài)上與對照組（Lentivirus-GFP感染組）無明顯差異，油紅染色均顯示有多房脂滴。進一步研究發(fā)現(xiàn)實驗組細胞與棕色脂肪分化相關的轉錄因子Prdm16、PGC-1α表達量明顯增高，產(chǎn)熱基因UCP-1和線粒體標記基因COX8b、COX4也明顯升高，且實驗組細胞UCP-1蛋白水平表達量高于對照組，兩組數(shù)據(jù)有統(tǒng)計學差異（p<0.005）。
　　結論：
　　Dicer基因脂肪特異性敲除