針對柯薩奇病毒和埃博拉病毒的藥物篩選及活性研究.pdf

1、雖然科學技術的進步改變了我們的生存環(huán)境和生存空間，使得我們的生活更加豐富，便捷以及安逸，但全球性流行傳染病卻常常在提醒我們:我們生活在一個微生物的世界里，微生物（包括病毒，細菌，真菌等）以驚人的變異速度來適應和抵抗藥物及人體免疫防御機制，導致感染疾病的大規(guī)模爆發(fā)和流行，因此我們必須加快新藥研制的步伐，期望能獲得活性好、毒副作用低的藥物來預防和治療病原菌感染引起的疾病。小分子化合物是藥物候選物的重要來源，目前新藥的研發(fā)仍然依賴基于靶點特異

2、的篩選模型對大規(guī)模的化合物庫篩選，從中發(fā)現活性化合物。本論文通過建立抗病毒篩選模型，從實驗室前期構建的化合物庫中尋找活性化合物，并對所篩選得到的活性化合物進行作用機制的初步研究。病毒的侵染過程一般可以分為吸附、吸附與進入、大分子合成、裝配與釋放5個階段，從病毒與宿主細胞表面接觸、釋放核酸進入胞漿，到病毒的各個活性蛋白劫持宿主生物合成系統(tǒng)來完成自身結構蛋白和基因組的復制，以及最后的組裝成子代病毒釋放，這一系列的過程均可以作為藥物設計的靶點

3、。本文針對兩個重要病毒柯薩奇病毒(Coxsackie virus)和埃博拉病毒(Ebola virus)進行研究，它們都屬于小RNA病毒，并且都對人類健康具有很大的危害性。其中埃博拉病毒包膜蛋白GP(Glycoprotein)在介導埃博拉病毒進入受體細胞過程中發(fā)揮重要作用?？滤_奇病毒B亞型的3C蛋白酶與小RNA病毒蛋白的剪切過程有關，對柯薩奇病毒在宿主細胞內的自我復制發(fā)揮著非常重要的作用，針對柯薩奇病毒B亞型的3C蛋白酶的抑制劑研究以及

4、針對埃博拉病毒包膜蛋白GP的抑制劑的研究都是抗病毒藥物的重要研究手段。
　　本研究分別通過基于熒光共振能量轉移(FRET)原理進行體外的CVB3-3C蛋白酶抑制劑篩選，以及基于報告基因熒光素酶（luciferase）對攜帶埃博拉囊膜蛋白的假病毒EBOV-GP進行了GP抑制劑的篩選。通過高通量篩選，獲得了7個具有較好活性的CVB3-3C蛋白酶非競爭性可逆抑制劑，以及7個有顯著活性的EBOV-GP抑制劑，其中CVB3-3C蛋白酶抑制劑

5、的IC50在2.5μM～7.73μM之間，與蘆平曲韋(IC50=1.57μM)達到同一活性水平，顯示出良好的3C蛋白酶抑制活性。同時所篩選到的EBOV-GP抑制劑的IC50范圍為0.0257μM～1.071μM，其中化合物F0393-0147對EBOV-GP有特異性抑制效果。通過本研究，基于特異高通量篩選模型，分別對CVB3-3C蛋白酶和EBOV-GP進行高通量藥物篩選，從實驗室具有自主知識產權的6000個化合物中篩選出了多個具有活性的