定量PCR應用于柯薩奇B病毒檢測及抗病毒藥的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:通過建立一種競爭法定量PCR(Quantitative-Competitive PCR,QC-PCR),定量檢測CVB3感染小鼠血中的CVB3 RNA,研究苦參中抗CVB有效成分對VM產生治療作用的機制——抗病毒作用以及作用的量效關系.為抗柯注射液的臨床應用提供基礎理論依據(jù).方法:1.競爭法定量PCR的方法學建立:首先以重疊突變延伸法合成一個內含突變點即BamHI酶切位點的內參DNA片段,且與待測病毒的目的擴增基因序列相似,僅一個

2、堿基的差異;然后,將它與由CVB逆轉錄而業(yè)的樣本cDNA共同作PCR擴增;擴增產物以BamHI酶切分離;最后根據(jù)已知量的內參業(yè)計算待測樣本CVB RNA的量.2.對競爭法定量PCR的評價及證實抗柯注射液的抗病毒作用:檢測CVB3病毒原液的感染滴度TCID<,50>,然后將其作10倍梯度稀釋,以QC-PCR檢測每一個稀釋度的CVB3 RNA量.結結果作相關回歸分析.結論:1.競爭法定量PCR與傳統(tǒng)的空斑法和TCID<,50>檢測結果一致,

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