CUL4A通過調控Hippo通路促胃癌細胞增殖和侵襲的分子機制.pdf

1、目的：
　　探討CUL4A在胃癌中的作用機制和臨床意義
　　方法：
　　免疫組織化學檢測124例胃癌組織中CUL4A的表達，分析其表達水平與胃癌患者臨床病理特征和生存時間的關系；觀察過表達和干擾CUL4A對胃癌細胞增殖、侵襲和EMT的影響；裸鼠動物模型驗證干擾CUL4A對胃癌細胞增殖的影響；實時定量 PCR、免疫熒光和蛋白質免疫共沉淀等方法探討 CUL4A失活LATS1-Hippo通路的分子機制；熒光素酶報告基因等方法

2、探討miR-9和miR-137對 CUL4A的靶向調控作用；最后在體外細胞水平和新鮮胃癌組織中驗證miRNAs-CUL4A-LATS1-Hippo調控軸在胃癌細胞中的作用和臨床意義。
　　結果：
　　免疫組織化學結果顯示 CUL4A蛋白表達水平與胃癌患者 TNM分期（P=0.025）和淋巴結轉移（P=0.003）密切相關，高表達CUL4A蛋白預示胃癌患者預后不良（P=0.026）。過表達CUL4A促進胃癌細胞增殖、侵襲和EM

3、T，干擾CUL4A則抑制胃癌細胞增殖、侵襲和EMT。過表達CUL4A能降低 LATS1和p-YAP蛋白的表達，而不影響MST1/2蛋白的表達，促進YAP蛋白入核，干擾CUL4A表達則相反，并且顯著抑制YAP相關靶基因的轉錄。免疫共沉淀結果顯示CUL4A與LATS1蛋白結合發(fā)揮作用。分別上調miR-9和miR-137的表達抑制胃癌細胞增殖和侵襲，下調CUL4A蛋白表達，而不影響CUL4A mRNA表達，熒光素酶報告基因結果表明miR-9和

4、miR-137靶向調控CUL4A的表達。不僅如此，miR-9和miR-137通過靶向CUL4A調控Hippo通路，過表達CUL4A能部分逆轉miR-9和miR-137抑制胃癌細胞增殖和侵襲的作用。在胃癌組織中， miR-9和miR-137的表達水平均與CUL4A和YAP蛋白表達量呈負相關。
　　結論：
　　miR-9/137-CUL4A-LATS1-Hippo調控軸失衡參與了胃癌細胞惡性進展， CUL4A可作為治療胃癌的一個