枳菊解郁湯對(duì)抑郁小鼠學(xué)習(xí)記憶及NCAM表達(dá)的影響.pdf

1、本研究采用（高臺(tái)、電擊足底、斜籠實(shí)驗(yàn)、禁水、禁食、冷水刺激、通宵照明）多因素慢性不可預(yù)知應(yīng)激建立抑郁動(dòng)物模型，應(yīng)激持續(xù)21天，并對(duì)各組小鼠采用中藥復(fù)方枳菊解郁湯以及單味藥物枳實(shí)和石菖蒲進(jìn)行灌胃處理。將青年小鼠分為對(duì)照組，模型組，中藥復(fù)方組、氟西汀組、與兩個(gè)單味藥枳實(shí)組與石菖蒲組。采用開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠自發(fā)活動(dòng)和探究行為，采用懸尾實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠情緒行為變化，采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的變化；進(jìn)行酶活實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)小鼠海馬及

2、前腦皮層CAT和MAO活性變化；HE染色，觀察小鼠海馬和前腦皮層神經(jīng)元形態(tài)學(xué)改變；采用免疫組化檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞黏附分子（neural cell adhesion molecule，NCAM）在海馬和前腦皮層表達(dá)，以探討中藥復(fù)方的抗抑郁作用及其機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　1．開(kāi)場(chǎng)行為：模型組小鼠與對(duì)照組相比，直立次數(shù)、穿越格數(shù)、修飾次數(shù)均減少，中央格停留時(shí)間延長(zhǎng)，排便粒數(shù)增多。相比于模型組小鼠，中藥復(fù)方枳菊解郁湯能夠改善抑郁小鼠對(duì)

3、新環(huán)境的適應(yīng)能力，自發(fā)活動(dòng)和探究行為，緩解對(duì)新環(huán)境的緊張情緒，而其中的單味藥枳實(shí)，石菖蒲對(duì)小鼠的開(kāi)場(chǎng)行為改善效果較弱。
　　2．懸尾實(shí)驗(yàn)：相比于對(duì)照組小鼠，模型組小鼠后4分鐘累積不動(dòng)時(shí)間增加，第一次靜止不動(dòng)時(shí)間顯著減小。相比于模型組小鼠，氟西汀組、中藥復(fù)方組小鼠后四分鐘累計(jì)不動(dòng)時(shí)間減少，第一次靜止不動(dòng)時(shí)間明顯增加，絕望程度得到緩解；而枳實(shí)組與石菖蒲組小鼠第一次靜止不動(dòng)時(shí)間與累積不動(dòng)時(shí)間則無(wú)顯著性差異。
　　3．水迷宮實(shí)驗(yàn)：相

4、比于對(duì)照組小鼠，定位航行實(shí)驗(yàn)中模型組小鼠尋找平臺(tái)的時(shí)間顯著延長(zhǎng)；空間搜索實(shí)驗(yàn)中，模型組小鼠在平臺(tái)象限停留時(shí)間顯著減少。相比于模型組小鼠，氟西汀組、中藥復(fù)方枳菊解郁湯組小鼠逃避潛伏期均明顯減少。氟西汀組、中藥復(fù)方組小鼠在平臺(tái)象限停留的時(shí)間明顯增加。而枳實(shí)組與石菖蒲組并沒(méi)有得到明顯改善。
　　4．酶活性實(shí)驗(yàn)：與對(duì)照組小鼠相比，模型組小鼠腦內(nèi)CAT活性顯著降低、MAO活性明顯升高；相比于模型組小鼠，氟西汀組與中藥復(fù)方組小鼠腦內(nèi)CAT活性

5、明顯升高，MAO的活性明顯降低，然而枳實(shí)組小鼠與石菖蒲組小鼠CAT活性與MAO活性并無(wú)顯著性差異。
　　5．HE染色：對(duì)照組、氟西汀組和中藥復(fù)方組小鼠海馬CA1、CA3與DG區(qū)細(xì)胞數(shù)量較多，沒(méi)有或者極少的變形細(xì)胞，大小基本相同，細(xì)胞結(jié)構(gòu)比較完整，細(xì)胞排列整齊緊密，細(xì)胞核基本位于細(xì)胞的中央，結(jié)構(gòu)明顯并且邊緣清楚。細(xì)胞核染色比較深。前腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞排列整齊，形態(tài)規(guī)整并且染色清晰，少有細(xì)胞變形現(xiàn)象。
　　模型組、枳實(shí)組以及石菖蒲

6、組小鼠海馬CA1，CA3區(qū)的神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)萎縮，并且出現(xiàn)了變形，細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞之間的空隙變大，胞核固縮等現(xiàn)象。前腦皮層細(xì)胞出現(xiàn)在形態(tài)不規(guī)則現(xiàn)象，數(shù)量減少并且層次松散，出現(xiàn)三角形細(xì)胞和梭形細(xì)胞，細(xì)胞與細(xì)胞出現(xiàn)中斷現(xiàn)象，染色淡并且著色不勻。
　　6. NCAM免疫組化：與對(duì)照組小鼠相比，模型組小鼠NCAM陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在海馬各區(qū)和前腦皮層均明顯減少，平均目標(biāo)灰度值增大，表達(dá)明顯減弱。相比于模型組小鼠，NCAM陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在氟西汀組和中藥復(fù)

7、方組小鼠在海馬DG區(qū)和前腦皮層表達(dá)較多，平均目標(biāo)灰度值降低，但在海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)的表達(dá)相對(duì)較少；枳實(shí)組與石菖蒲組NCAM陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)相對(duì)較少。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論：
　　1.中藥復(fù)方枳菊解郁湯明顯改善由慢性應(yīng)激導(dǎo)致的小鼠抑郁樣行為；顯著增強(qiáng)抑郁模型小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，表現(xiàn)出一定的抗抑郁作用。
　　2.中藥復(fù)方枳菊解郁湯能夠明顯提高抑郁模型小鼠CAT活性和降低MAO活性，以減弱神經(jīng)元的損傷。
　　3.中藥復(fù)方枳菊解郁