豬源益生性乳酸菌分離篩選及其在發(fā)酵飼料中的應(yīng)用研究.pdf

1、發(fā)酵飼料主要是是利用乳酸菌等微生物的自身特性，在厭氧條件下發(fā)酵，產(chǎn)生大量乳酸等有機(jī)酸，降低飼料的pH值，從而增加乳酸菌數(shù)量，減少飼料中的有害菌。這類發(fā)酵飼料在生豬養(yǎng)殖上顯示出了良好的發(fā)展的潛力。為獲取對(duì)豬發(fā)酵飼料具有應(yīng)用價(jià)值的乳酸菌菌株，我們從豬腸道分離到141株乳酸菌，通過(guò)對(duì)菌株產(chǎn)酸性能的初篩，篩選出10株具有制作發(fā)酵飼料潛力的乳酸菌菌株;然后對(duì)這些菌株的抗逆性及益生性進(jìn)行了探究，以期篩選出既具有較快發(fā)酵速度，又具有益生性能和抗逆性能

2、的乳酸菌;在此基礎(chǔ)上，應(yīng)用這些乳酸菌進(jìn)行發(fā)酵飼料制作，并對(duì)所獲發(fā)酵飼料的特性進(jìn)行研究，論文分三部分進(jìn)行。
　　1、豬源乳酸菌的分離篩選以及鑒定
　　本試驗(yàn)擬分離篩選產(chǎn)酸能力強(qiáng)的豬源乳酸菌株，研究其發(fā)酵產(chǎn)乳酸能力。試驗(yàn)分別采集仔豬腸道食糜、粘膜及豬糞便，采用常規(guī)分離手段分離獲到141株乳酸菌株。通過(guò)生化鑒定、形態(tài)學(xué)觀察及菌株的產(chǎn)酸能力測(cè)定，最終篩選到產(chǎn)乳酸速度快、產(chǎn)乳酸量高以及終末pH值較低的10株乳酸菌。16S rDNA序列

3、分析表明，上述10株菌分別為唾液乳桿菌（Lactobacillus salivarius）、約氏乳桿菌（Lactobacillus johnsonii）和糞腸球菌（Enterococcus Faecalis）。結(jié)果表明，豬源乳酸菌的菌株種類多樣，并且乳酸菌的產(chǎn)酸能力與發(fā)酵速度也不一致，部分菌株具有較快的發(fā)酵速度與產(chǎn)乳酸能力。
　　2、豬源乳酸菌的抗逆性及益生性研究
　　本研究旨在對(duì)豬腸道中分離到的乳酸菌的抗逆性和益生性進(jìn)行研

4、究，擬為獲取可用于發(fā)酵飼料生產(chǎn)接種菌奠定基礎(chǔ)。采用體外法，對(duì)試驗(yàn)一篩選得到的10株乳酸菌進(jìn)行耐酸、耐膽鹽、抑菌、溫度敏感性和耐抗生素試驗(yàn)檢測(cè)。結(jié)果顯示，10株乳酸菌中，編號(hào)為L(zhǎng)71和L104的乳酸菌株可耐受pH2.5環(huán)境，暗示其對(duì)胃酸環(huán)境有一定的耐受性;L33、L35、L37和L104菌株可能耐受豬腸道的膽鹽環(huán)境;L22、L24、L26、L71和L96菌株發(fā)酵上清液對(duì)大腸桿菌K88、K99和雞白痢沙門氏菌均有較好的抑制效果;L96菌株對(duì)

5、60℃溫度具有一定耐受性;L71和L96對(duì)抗生素最低耐受量在益生菌的測(cè)定在相對(duì)較低的濃度范圍內(nèi)。編號(hào)為L(zhǎng)22、L24、L26、L71和L96的乳酸菌具有較好的抑菌作用，其中L71的耐酸性、抑菌性以及產(chǎn)酸性能，有用做發(fā)酵飼料生產(chǎn)接種益生菌的潛力。
　　3、乳酸菌發(fā)酵飼料的特性研究
　　試驗(yàn)以無(wú)抗飼料為發(fā)酵底物，比較分析了來(lái)自于試驗(yàn)二中的不同乳酸菌對(duì)發(fā)酵飼料的干物質(zhì)、pH值、乳酸、VFA及飼料中乳酸菌和大腸桿菌菌落數(shù)的影響。結(jié)果

6、顯示，除L104菌株外，其他各組發(fā)酵飼料的pH值均低于4.5，蛋白質(zhì)含量等均高于原飼料。接種L26、L35、L37和L71菌株的發(fā)酵飼料組的乳酸含量分別為249mmol/kg、243 mmol/kg、259.56 mmol/kg和234 mmol/kg，顯著高于對(duì)照組（102.58mmol/kg）(P＜0.05);接種L22號(hào)菌株的處理組的pH值顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)。針對(duì)L22、L37和L71菌株的發(fā)酵飼料在揮發(fā)性脂肪酸以及飼

7、料乳酸菌和大腸桿菌的計(jì)數(shù)上的結(jié)果顯示，除L37和L71號(hào)菌株在丙酸和異戊酸上有差異外，其他各揮發(fā)酸含量并無(wú)差異。較原料相比，上述三株菌以及自然發(fā)酵能增加了飼料中乳酸菌數(shù)量，但大腸桿菌的數(shù)量顯著低于自然發(fā)酵組飼料（P＜0.05），結(jié)果說(shuō)明，L22、L37和L71菌株在發(fā)酵飼料中可產(chǎn)生大量乳酸等物質(zhì)，進(jìn)而降低了飼料pH值;此外，上述菌株還可增加發(fā)酵飼料的乳酸菌數(shù)量，抑制飼料中大腸桿菌數(shù)量。結(jié)果顯示，L22、L37和L71菌株均可用于發(fā)酵飼料