即墨溫泉耐熱性木聚糖酶產(chǎn)生菌的分離及其酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、耐熱型木聚糖酶是可將木聚糖降解成低聚木糖和木糖的水解酶，它在飼料、造紙、食品、能源工業(yè)和環(huán)境科學(xué)上有著廣闊的應(yīng)用前景。隨著分子生物學(xué)、結(jié)構(gòu)生物學(xué)的發(fā)展及蛋白質(zhì)工程的應(yīng)用，對(duì)木聚糖酶結(jié)構(gòu)和功能的研究不斷深入。
　　 本文首先通過(guò)對(duì)從即墨溫泉水中用透明圈篩選法獲得的6株(L1，L2，L3，L4，L5，L6)產(chǎn)耐熱性木聚糖酶菌株的比較分析，得到一株高產(chǎn)木聚糖酶菌株L2，并在此基礎(chǔ)上對(duì)L2進(jìn)行了與酶的活性有關(guān)的因素分析如：半纖維的添加方

2、式，半纖維素的添加量，溫度，pH，碳源，氮源，表面活性劑Tween-80，金屬離子和發(fā)酵時(shí)間等對(duì)L2產(chǎn)酶活性的影響，得出L2的最佳發(fā)酵條件是：半纖維素以2/3底物濃度泥狀物的形式加入；溫度75℃；PH8.69;碳源采用廉價(jià)的半纖維素；氮源采用硫酸銨和硝酸銨(1:1)；金屬離子對(duì)酶活影響較大，Li+、Mg2+、Ca2+有激活作用，Ba2+、Fe3+、Ag+、Sr2+有抑制作用；EDTA對(duì)木聚糖酶的抑制作用明顯，在反應(yīng)體系中添加EDTA的濃

3、度≥0.5mmol/L時(shí)，L2產(chǎn)生的木聚糖酶活性完全被抑制；發(fā)酵時(shí)間144h時(shí)酶活最高720.61U/mL。利用國(guó)內(nèi)外普遍用于優(yōu)化的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)已分純菌種的發(fā)酵溫度(28℃，37℃，50℃)、發(fā)酵時(shí)間(48h，96h，144h)、發(fā)酵液pH(6.09，7.54，8.69)以及菌株類(lèi)別等影響發(fā)酵產(chǎn)酶的因素進(jìn)行正交組合，設(shè)計(jì)出一套簡(jiǎn)易發(fā)酵裝置流程，按正交設(shè)計(jì)進(jìn)行發(fā)酵。利用DNS（3,5-二硝基水楊酸）顯色法以木糖標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)出發(fā)酵過(guò)程中所產(chǎn)

4、木聚糖酶活力。通過(guò)極差分析法對(duì)正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，得到影響該產(chǎn)生菌發(fā)酵產(chǎn)木聚糖酶的因素依次為：菌株＞時(shí)間＞pH＞溫度。其最優(yōu)的發(fā)酵溫度為50℃，最優(yōu)的發(fā)酵時(shí)間為144h，最優(yōu)發(fā)酵液pH為8.69，最佳的菌株為L(zhǎng)2，發(fā)酵條件得到優(yōu)化，提高了木聚糖酶產(chǎn)量。通過(guò)對(duì)L2在發(fā)酵時(shí)間，溫度，pH，麩皮含量以及貯藏時(shí)間等因素的固態(tài)發(fā)酵優(yōu)化研究，得到固態(tài)發(fā)酵最優(yōu)條件：發(fā)酵時(shí)間144h，溫度70℃，pH7.54，麩皮含量2/3，儲(chǔ)藏時(shí)間120d時(shí)酶