α-細辛醚對人食管癌細胞系Eca-109增殖抑制作用及機制研究.pdf

1、目的:運用現代分子生物學實驗技術，探討α-細辛醚抗食管癌作用靶點及機制，為臨床運用中藥治療食管癌提供必要的實驗依據，同時也為臨床治療食管癌增添一種高效、低毒、價廉的中藥制劑。
　　方法:
　　1．用不同劑量的α-細辛醚注射液，依次作用在人食管癌細胞株上，四甲基偶氮唑鹽法（MTT法）測定Eca-109細胞的增殖抑制率；通過計算細胞增殖抑制率、繪制增殖抑制曲線等，綜合分析α-細辛醚對人食管癌細胞系 Eca-109細胞增殖活性的影

2、響。
　　2．應用普通倒置顯微鏡和倒置熒光顯微鏡技術，觀察α-細辛醚作用于人食管癌細胞系Eca-109后，細胞生長狀況及形態(tài)學變化。
　　3．運用流式細胞術，檢測細胞周期及細胞凋亡率，探討α-細辛醚對人食管癌細胞系Eca-109的增殖抑制的作用及機制。
　　4．采用蛋白免疫印跡技術及熒光定量PCR技術對細胞內的相關蛋白（Caspase-3、Caspase-9、CyclinD1和CDK4）的表達水平進行分析，探討α-細辛

3、醚對人食管癌細胞株Eca-109的作用機制及與基因表達調控的關系。
　　結果:
　　1．α-細辛醚作用在人食管癌細胞系 Eca-109顯示有明顯的抑制細胞生長的作用，與陰性對照組的比較，差異有統(tǒng)計學意義；計算表明量效關系明顯，回歸方程為：Y=0.5376X+4.022，其中，R2=0.993，P=0.000﹤0.05。
　　2．α-細辛醚處理后，可見細胞典型的凋亡改變，細胞縮小、核膜有的厚薄不均或者呈半月形狀，另外可見

4、部分細胞膜結構破壞。
　　3．1)α-細辛醚作用24小時后，G0/G1期的細胞數顯著升高，跟陰性對照組的比較，差異具有統(tǒng)計學意義；S期的細胞數明顯下降，與陰性對照組的比較，差異亦具有統(tǒng)計學意義。2)凋亡指數和陰性對照組的相比，與劑量的增加成正比，差異有統(tǒng)計學意義。
　　4．蛋白免疫印跡方法和熒光定量 PCR法檢測α-細辛醚作用后細胞內 CyclinD1、CDK4表達量明顯減少，Caspase-3、Caspase-9表達量顯著

5、增加，差異有統(tǒng)計學意義。
　　結論:
　　1．α-細辛醚作用于人食管癌細胞表現出明顯的抑制作用，且其作用是劑量和時間相關性的。
　　2．α-細辛醚作用在人食管癌細胞上對其的增殖有顯著的抑制效應，主要表現在兩個方面：促凋亡和抑增殖的作用。
　　3．α-細辛醚抑制人食管癌細胞系Eca-109增殖的主要作用機理可能與阻滯細胞的周期在 G0/G1期，以及在細胞周期 G1→S期檢測點的調控因子 CyclinD1和CDK4的