LMP1調控轉錄因子EGFR和STAT3在鼻咽癌細胞核相互作用的研究.pdf

1、真核生物基因的表達調控主要是轉錄水平的調控,其受順式作用元件與反式作用因子及其相互作用調節(jié),兩者結合才能共同實現對轉錄的調控。真核生物基因順式作用元件分為啟動子、增強子、沉默子,是調節(jié)基因轉錄的特定DNA序列；參與調節(jié)靶基因轉錄的的反式作用因子(也稱為轉錄因子)是能直接或間接識別或結合在各順式作用元件核心序列上,參與調控轉錄效率的一類蛋白質。
　　 表皮生長因子受體(epidermal growth factor recepto

2、r,EGFR)是一個分子質量為170 kD的跨膜糖蛋白,屬于受體酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinases,RTKs)家族。近年來,在許多腫瘤如皮膚癌、乳腺癌、宮頸癌、膀胱癌、卵巢癌等的細胞核內發(fā)現高水平的EGFR表達,其作為一種新型轉錄因子在核內獨立或作為轉錄共活化子,與其他轉錄因子相互作用于與細胞周期行進或細胞增殖密切相關的靶基因,促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展。轉錄因子STAT3(signaltransducer and

3、activation of transcription,STAT3)是多種細胞因子和生長因子發(fā)揮作用的關鍵信號分子,其通過酪氨酸磷酸化的STAT之間形成同源二聚體或異源二聚體活化后移位至細胞核,激活多種相關下游靶基因的表達。STAT3在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起促進細胞增殖、抑制細胞凋亡、免疫逃避、促進血管生成及腫瘤細胞侵襲和轉移等多種生物學功能的作用。
　　 EB病毒(Epstein-Barr Virus,EBV)是一種DNA致瘤病毒

4、,與B細胞、上皮細胞、T細胞的惡性轉化有關,并與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關,其致瘤作用主要是通過病毒編碼蛋白影響宿主細胞的基因表達及相應的生物學行為實現。潛伏膜蛋白1(Latent Membrane Protein
　　 1,LMP1)是EBV編碼的癌蛋白,其生物學功能涉及細胞轉化、凋亡、分化、細胞周期行進以及參與惡性腫瘤的侵襲和轉移。
　　 有研究發(fā)現在鼻咽癌細胞中LMP1能調控EGFR表達和上調EGFR磷酸化水平,進而促

5、進細胞增殖,并發(fā)現LMP1可以調控EGFR核移位,并呈EGF配體非依賴性。同時,不少作者認為EGFR需與其他能直接結合于DNA的轉錄因子相互作用方能發(fā)揮促進細胞增殖的生物學作用。并有報道發(fā)現在鼻咽癌細胞中存在LMP1激活的JAK/STAT信號通路,通過JAK3促進STAT3705位酪氨酸磷酸化,磷酸化活化后的STAT3即核移位并核內積聚,并且LMP1調控磷酸化STAT3核移位呈705位酪氨酸磷酸化依賴性。因此,我們推測LMP1有可能通過

6、誘導轉錄因子EGFR和STAT3核移位并調節(jié)其相互作用,從而在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮新的生物學作用。
　　 為觀察在LMP1調控下轉錄因子EGFR和STAT3在鼻咽癌細胞核內是否存在核移位和共定位,選擇激光共聚焦掃描顯微鏡方法進行檢測,以不表達LMP1的鼻咽癌CNE1細胞為陰性對照,發(fā)現在LMP1陽性表達的鼻咽癌CNE1-LMP1細胞中存在EGFR和STAT3蛋白的核移位并且兩者存在共定位；應用免疫共沉淀及Western-blot方

7、法檢測,顯示LMP1可促進鼻咽癌細胞內轉錄因子EGFR和STAT3呈復合物結合；為明確兩者復合物結合的亞細胞定位,分別提取了胞漿和核蛋白,進一步應用免疫共沉淀及Western-blot方法檢測,揭示了EGFR和STAT3復合物結合的亞細胞定位主要是細胞核。
　　 綜上所述,本研究發(fā)現了LMP1表達陽性的鼻咽癌細胞內存在轉錄因子EGFR和STAT3的核移位和共定位,LMP1可調節(jié)EGFR和STAT3呈復合物結合并且其結合的亞細胞定