嘌呤霉素敏感的氨肽酶對β-淀粉樣肽誘導神經(jīng)細胞凋亡的影響.pdf

1、背景
　　 阿爾茨海默病(Alzheimer's Disease，AD)，又稱老年癡呆，是老年人群癡呆的最常見、最重要的類型。臨床主要表現(xiàn)為進行性的記憶力減退，認知功能障礙等癥狀。其患病率隨年齡增加而增高，隨著我國及世界人口結(jié)構(gòu)日益趨向老齡化，AD的發(fā)病率逐年上升，嚴重危害老年人的身心健康和生活質(zhì)量，給病人造成巨大的痛苦，給家庭和社會帶來沉重的負擔，已成為嚴重的社會問題，引起了普遍關(guān)注。
　　 阿爾茨海默病發(fā)病機制尚不明

2、確，目前對其治療也沒有行之有效的方法。研究顯示疾病的發(fā)生與其病理學改變有關(guān)，其特征性病理改變主要表現(xiàn)為:神經(jīng)元細胞內(nèi)神經(jīng)纖維纏結(jié)(neurofibrillary tangles，NFT)、細胞外老年斑或神經(jīng)炎性斑(senile plaque，SP)的形成及神經(jīng)細胞的過度凋亡。神經(jīng)纖維纏結(jié)主要由高度磷酸化的Tau蛋白沉積所致;老年斑則主要是由β淀粉樣肽(β-amyloid peptide，Aβ)沉積引起的，并進一步引起神經(jīng)細胞凋亡。

3、>　　 嘌呤霉素敏感的氨肽酶(puromycin-sensitive aminopeptidase，PSA/NPEPPS)是一種廣泛分布的金屬氨肽酶，在腦中含量很豐富。Constam等研究發(fā)現(xiàn)PSA具有蛋白水解作用，在有絲分裂期與紡錘體微管的形成有關(guān)，并且PSA的抑制劑能引起細胞的凋亡。此外PSA對于細胞信號轉(zhuǎn)導、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運、主要組織相容性復合物Ⅰ(MHCⅠ)的處理、細胞周期調(diào)節(jié)、胚胎發(fā)育都有重要作用。近年來研究發(fā)現(xiàn)PSA可以降解Ta

4、u蛋白，改善AD的癥狀，為以Tau蛋白為靶標治療AD提供了新思路——Tau蛋白降解劑。作為AD病理學改變之一的Aβ沉積，與Tau蛋白異常過度磷酸化及神經(jīng)細胞的凋亡密切相關(guān)，但是Aβ與PSA之間的關(guān)系卻很少有人研究。本研究試圖探討Aβ誘導的神經(jīng)細胞凋亡與PSA之間的關(guān)系。
　　 目的：
　　 在SH-SY5Y細胞內(nèi)沉默PSA表達、PC12細胞內(nèi)上調(diào)PSA表達的基礎(chǔ)上，加入Aβ25-35誘導細胞凋亡，研究PSA對Aβ誘導的神

5、經(jīng)細胞凋亡的影響，進一步探討PSA作為一種潛在的AD治療藥物的分子機制。
　　 方法：
　　 1.采用MTT法、Hoechst染色檢測不同濃度(0、10、20、30μmol/L)的Aβ25-35對SH-SYSY、PC12細胞的影響:MTT法檢測對細胞生長的影響;Hoechst染色檢測對細胞核形態(tài)的影響，從而確定最佳濃度的Aβ25-35來誘導細胞的凋亡。
　　 2.采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法在SH-SY5Y細胞中瞬時轉(zhuǎn)染PS

6、A-siRNA，在PC12細胞中瞬時轉(zhuǎn)染PSA重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染24h后，加20μmol/L的Aβ25-35處理細胞。SH-SY5Y細胞分組為:A:NC組，B:NC+Aβ25-35組，C:PSA-siRNA組，D: PSA-siRNA+Aβ25-35組;PC12細胞分組為: E:空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組，F(xiàn):空質(zhì)粒+Aβ25-35組，G:PSA過表達組，H:PSA過表達+Aβ25-35組。
　　 加入Aβ25-35作用24h后收集各組細胞，(a

7、)進行流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率;(b) Western blot檢測PSA、caspase-3蛋白的表達情況;(c)酶標儀檢測caspase-3活性。
　　 結(jié)果：
　　 1.Aβ25-35抑制SH-SY5Y細胞、PC12細胞增殖，細胞核發(fā)生細胞凋亡的形態(tài)學改變，確定20μmol/L的Aβ25-35作用24h進行實驗;
　　 2.在SH-SY5Y細胞中，沉默PSA表達能使Aβ25-35誘導的細胞凋亡率升高，促進c