MTT法檢測化療藥物對膠質(zhì)瘤細胞U251的抑制作用.pdf

1、目的：
　　 目前腦腫瘤中發(fā)病率最高的膠質(zhì)細胞瘤的預后仍然欠佳,仍然缺乏針對性強的抗腦膠質(zhì)瘤的化療藥物。尚沒有標準化方法來評價單一病人化療有效性和危險性,預先篩選臨床化療藥物對新化療藥評價以及如何選擇有效的化療藥物,對提高膠質(zhì)瘤治療效果、減少化療藥物的毒副作用有著十分重要的意義。篩選化療藥物用于指導臨床治療已經(jīng)得到廣泛認同。本研究的目的是以膠質(zhì)瘤細胞株U251為研究對象,應用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法比較在不同時間點觀察不同

2、濃度化療藥物對腫瘤細胞增殖能力的影響,為臨床化療篩選藥物及制定化療方案提供指導。
　　 方法：
　　 收集第3代處于對數(shù)生長期U-251腫瘤細胞,機械分離制成單細胞懸液,以含10％胎牛血清培養(yǎng)基重懸細胞,調(diào)整細胞密度,然后接種于96孔培養(yǎng)板,每孔180μL,使活細胞數(shù)量約4×103個/孔,置37℃,5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。待培養(yǎng)4～6h后,從培養(yǎng)箱中取出96孔板,加入抗腫瘤藥物20μL/孔,其濃度參照血漿峰濃度值(PPC

3、),按不同濃度依次添加。每個濃度設5個重復孔,同時設不加藥物的空白對照孔,繼續(xù)培養(yǎng)24,48h后,每孔加入5mg/mL MTT試劑20μL,再培養(yǎng)4h,棄上清,加入150μL二甲基亞砜(DMSO),置于搖床上低速震蕩使結晶充分溶解,待沉淀充分溶解后置于分光光度計上,測定每孔在570nm波長處吸光度(OD)值。計算抑制率,抑制率=(空白對照組OD值一實驗組OD值)/空白對照組OD值×100％。數(shù)據(jù)采用SPSS12.0軟件包對實驗結果進行單

4、因素方差分析,p＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結果
　　 1、伊立替康(CPT-11)隨著藥物濃度梯度的增大,腫瘤的抑制效果越明顯。隨時間延長而增大,抑制效果明顯。但整體各濃度梯度腫瘤抑制率水平均不高,均位于50％以下。
　　 2、卡莫司汀(BNCU)隨著藥物濃度梯度的逐漸增大,腫瘤抑制效果逐漸明顯,在較低濃度兩時間段對腫瘤抑制率相當,抑制效果無明顯差異。但兩時間段均顯示卡莫司汀有較好的腫瘤抑制率。

5、>　　 3、尼莫司汀(ANCU)對腫瘤抑制率隨濃度梯度增大而平穩(wěn)增大,單從某一時間段看,腫瘤抑制率在不同濃度梯度效果較穩(wěn)定。隨作用時間延長,腫瘤抑制效果逐漸明顯。
　　 4、替莫唑胺(TMZ)隨濃度梯度增大,對腫瘤抑制效果明顯增高,作用時間延長后,腫瘤抑制率明顯增大,呈現(xiàn)強的腫瘤抑制能力。
　　 5、環(huán)磷酰胺(CTX)兩時間段的腫瘤抑制率與藥物濃度梯度均無明顯相關性。且腫瘤抑制率均很低,藥物效果無法比較。
　　

6、 6、聯(lián)合應用替莫唑胺+伊立替康顯示,隨濃度梯度增大,腫瘤抑制率增高較明顯,對腫瘤抑制作用較強,抑制率水平較高。在不同時間段,延長藥物作用時間,腫瘤抑制效果越明顯。
　　 7、不同藥物同一濃度梯度比較結果顯示,在24小時時間段,各組藥物對腫瘤抑制效果均不高,只有聯(lián)合用藥組效果略好。延長用藥時間,到48小時時間段,尼莫司汀、替莫唑胺以及聯(lián)合用藥組對腫瘤抑制效果明顯,抑制率有明顯增高。
　　 結論
　　 環(huán)磷酰胺的體