化療后骨髓再生細(xì)胞移植治療大鼠缺氧缺血性腦病的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、圍產(chǎn)期窒息所致缺氧缺血性腦?。╤ypoxic-ischemic encepholopathy,HIE）是新生兒期危害最大的常見病之一，常引起新生兒死亡和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育障礙。目前臨床上尚無有效的治療藥物和方法，因此探討HIE 新的治療方法具有十分重要的意義。骨髓干細(xì)胞(bone marrow stem cells BMSCs)指來源于骨髓的具有分化潛能的細(xì)胞，亦稱骨髓衍化細(xì)胞，主要包括造血干細(xì)胞(hematopoietic stem cel

2、ls， HSCs)、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone－mesenchymal stem Cells BMSCs)和內(nèi)皮前體細(xì)胞（endothelial cell progenitors ECP）等。作為神經(jīng)移植的來源細(xì)胞, BMSCs具有獨(dú)特的優(yōu)越性,體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明BMSCs能明顯改善缺血大鼠的神經(jīng)功能，其可能機(jī)制主要為分泌多種營養(yǎng)因子和細(xì)胞因子，從而激活內(nèi)源性修復(fù)機(jī)制促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)和功能恢復(fù)。5－氟尿嘧啶（5－Fu）預(yù)處理后的大鼠，其BMSCs

3、各種營養(yǎng)因子表達(dá)量明顯增加，尤為各種促血管生長因子，稱之為骨髓再生細(xì)胞（Bone Marrow Regenerative Cells，BMRCs）。BMRCs植入HIE大鼠腦內(nèi)后，能否存活、遷移至損傷部位？能否激活內(nèi)源性修復(fù)機(jī)制從而促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)和功能恢復(fù)？與普通BMSCs相比，是否具有更大的治療潛能？為此，進(jìn)行了以下研究. 本實(shí)驗(yàn)的目的: 在于探討B(tài)MRCs移植后對(duì)HIE大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)的影響，并進(jìn)一步探討這此種細(xì)胞在治療HIE

4、中的價(jià)值及可能的機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)方法：制作新生大鼠HIE模型，隨機(jī)分為假手術(shù)組、PBS治療組(HIE/PBS group)、骨髓干細(xì)胞移植組(HIE/BMSCs group)、骨髓再生細(xì)胞移植組(HIE/BMRCs group)。HIE模型制作后后第3天，分別將3微升PBS、DAPI標(biāo)記后的BMSCs及BMRCs經(jīng)右側(cè)側(cè)腦室移植入HIE大鼠腦內(nèi)。各組大鼠分別于移植后第三周進(jìn)行行為學(xué)檢測，并應(yīng)用熒光激發(fā)檢測移植的細(xì)胞在腦內(nèi)存活情況，采

5、用HE染色和免疫組化法檢測缺血區(qū)病理改變及新生的血管，用RT-PCR法檢測VEGF-mRNA的表達(dá)情況，用TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：本模型穩(wěn)定可靠、重復(fù)性好。行為學(xué)檢測提示，BMRCs治療組的感覺運(yùn)動(dòng)功能明顯改善（P<0.05）。經(jīng)PCR檢測發(fā)現(xiàn)，BMRCs治療后的大鼠，其腦內(nèi)VEGF-mRNA表達(dá)量明顯增加，在其后的免疫組化檢測及原位雜交檢測中，我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)治療后大鼠腦內(nèi)新生血管明顯增多、凋亡細(xì)胞顯著減少。