苦參堿誘導U937細胞分化及其相關(guān)機制的研究.pdf

1、目的：白血病是常見的惡性腫瘤之一，基本特征為細胞增殖過度，分化受阻和凋亡障礙。U937細胞是常用于基礎(chǔ)研究的單核細胞白血病細胞株。目前治療白血病仍以化學藥物為主，但大部分此類藥物選擇性差，毒副作用大，對正常機體免疫與造血系統(tǒng)有較大的損害。所以，尋找選擇性高和毒副作用小的藥物是目前提高臨床療效的重要途徑?？鄥A（Matrine，C15H24N2O）是豆科槐屬植物中分離出來的一種生物堿，盛產(chǎn)于我國西部。多年來的藥理和臨床研究中發(fā)現(xiàn)苦參堿有抗

2、病毒、抗炎、抗心律失常、抗腫瘤等作用。有研究報道Mat能誘導腫瘤細胞向正常細胞分化，尚未見其對U937細胞誘導分化的相關(guān)研究。 本實驗擬通過細胞毒力實驗，細胞周期的改變觀察苦參堿對U937細胞增殖的影響；結(jié)合細胞功能學、細胞形態(tài)學及表面抗原的變化評價細胞分化；通過細胞周期蛋白及其抑制物的蛋白表達情況初步探討苦參堿誘導U937細胞分化的機制。 方法：1.采用臺盼藍拒染法研究Mat體外對U937細胞增殖的影響，并觀察細胞活力

3、以選擇藥物的誘導分化濃度，流式細胞術(shù)（FCM）檢測細胞周期的變化。 2.通過硝基四氮唑藍（NBT）還原實驗檢測U937細胞功能學改變，流式細胞儀檢測細胞表面分化抗原CD11b、CD14變化，倒置顯微鏡及光鏡觀察細胞形態(tài)學改變評價細胞分化。 3.免疫細胞化學法及Western Blot檢測cyclin E、cyclin A、p21 Waf1/Cip1蛋白表達的變化。 結(jié)果：1.苦參堿能有效抑制U937細胞的增殖，0

4、.1mg/mL Mat作用48h后U937細胞生長明顯受抑，其抑制作用呈時間和劑量依賴性。0.2mg/mL Mat作用不同時間后，G0/G1期細胞減少，S期細胞增多。 2.0.2mg/mL Mat作用U937細胞后可使細胞NBT陽性率及CD11b表達率增高，細胞聚集、貼壁，并可見偽足形成，光鏡下細胞核漿比減少，核仁變模糊，染色質(zhì)由疏松傾向致密。 3.免疫細胞化學法及Western Blot檢測結(jié)果顯示苦參堿作用后細胞cy

5、clin E、cyclinA蛋白表達下調(diào)，p21 Waf1/Cip1蛋白表達上調(diào)。 結(jié)論：1.Mat對U937細胞具有增殖抑制作用，呈量-效和時-效依賴關(guān)系；能使細胞發(fā)生S期阻滯。 2.一定濃度Mat作用一定時間后，能使U937細胞發(fā)生細胞功能學、形態(tài)學、表面抗原的變化，誘導細胞發(fā)生部分分化。 3.Mat誘導U937細胞分化的機制可能與細胞周期調(diào)控蛋白cyclin E、cyclin A表達下調(diào)及p21Waf1/C