兔抗原誘導(dǎo)性膝關(guān)節(jié)炎滑膜巨噬細(xì)胞MR成像的初步研究.pdf

1、研究背景與目的：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoidarthritis，RA)是一種侵犯關(guān)節(jié)滑膜，進(jìn)而破壞關(guān)節(jié)軟骨和骨質(zhì)，致勞動(dòng)力喪失甚至嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量的疾病。RA早期的病理改變是滑膜炎，此時(shí)會(huì)有巨噬細(xì)胞大量存在于RA炎癥滑膜以及軟骨/血管翳連接處。巨噬細(xì)胞活化后，會(huì)過(guò)度表達(dá)組織相容性復(fù)合物Ⅱ類分子、促炎或調(diào)節(jié)細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子、化學(xué)因子和化學(xué)趨化因子等，這些因子相互作用，形成級(jí)聯(lián)反應(yīng)，在RA滑膜炎及關(guān)節(jié)破壞中扮演樞紐作用。因此，

2、將巨噬細(xì)胞作為治療的靶點(diǎn)是臨床藥理學(xué)研究的一個(gè)熱點(diǎn)，但從影像學(xué)角度可否實(shí)現(xiàn)滑膜巨噬細(xì)胞的成像呢? 有關(guān)RA的研究一直是一個(gè)熱點(diǎn)課題。近年來(lái)，在免疫病理、發(fā)病機(jī)制以及藥物研究方面都取得了顯著進(jìn)步。比較而言，RA的影像學(xué)研究相對(duì)滯后，更缺乏影像學(xué)基礎(chǔ)研究。國(guó)內(nèi)RA的影像學(xué)研究主要集中于X線、CT，主要是臨床研究報(bào)道，回顧性研究居多。目前RA的臨床診斷仍然沿用美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)院1987年的標(biāo)準(zhǔn)，除了臨床癥狀和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，依據(jù)的是X線征象。

3、但是一旦X線改變常常提示病變已非早期。熊壯等利用X線位相對(duì)比成像，比傳統(tǒng)X線更早發(fā)現(xiàn)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎所致細(xì)微骨質(zhì)改變，包括骨質(zhì)疏松、骨質(zhì)破壞和骨膜反應(yīng)。但X線位相對(duì)比成像需要特殊設(shè)備，成像技術(shù)要求高，很難推廣應(yīng)用。CT的優(yōu)勢(shì)是橫斷圖像，密度分辨力高，可以比X線更為細(xì)致地觀察到骨骼改變。但上述研究都難以直觀反映RA的早期病變一滑膜炎。MRI軟組織分辨力高，成像方式靈活，在早期診斷方面優(yōu)勢(shì)獨(dú)特，且比X線、CT發(fā)現(xiàn)更早、更多的骨質(zhì)破壞，是唯一

4、能顯示滑膜、軟骨病變的影像手段，因此近來(lái)MRI的研究漸成熱點(diǎn)。雖然常規(guī)MRI可以直接顯示滑膜炎癥，實(shí)現(xiàn)早期診斷的目的，但在更深層次上揭示RA的細(xì)胞和分子學(xué)機(jī)制并不比X線、CT優(yōu)越。有意義的是，借助特異性分子對(duì)比劑，MRI可望從細(xì)胞分子水平顯示滑膜炎癥，從而為RA的分子影像學(xué)研究提供新的思路，并且可望在形態(tài)學(xué)改變之前反映滑膜巨噬細(xì)胞對(duì)藥物治療的反應(yīng)。 納米級(jí)粒子對(duì)比劑的開(kāi)發(fā)應(yīng)用為我們從微觀領(lǐng)域進(jìn)行MR巨噬細(xì)胞成像提供了可能。超微超

5、順磁性氧化鐵(ultrasmallsuperparamagneticironoxide，USPIO)粒子是一種新型的MR納米對(duì)比劑。與一般超順磁性氧化鐵(superparamagneticironoxide，SPIO)粒子都屬于網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對(duì)比劑，均以磁化率效應(yīng)為主要增強(qiáng)機(jī)制，但兩者間存在許多不同之處，與SPIO粒子相比，USPIO粒子體積更小，血漿半衰期更長(zhǎng)，除在肝脾中聚集外，還可以被組織細(xì)胞吞噬，具有較明顯的T1、T2弛豫增強(qiáng)效應(yīng)；

6、USPIO的T1弛豫率在15～25s-1mM-1左右，而SPIO粒子縮短T1的作用相對(duì)較弱。因此USPIO更適于巨噬細(xì)胞成像。 國(guó)內(nèi)關(guān)于RAMR成像方面的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)鮮有報(bào)道。目前應(yīng)用較廣泛且較成熟的整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ陀心z原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎、佐劑性關(guān)節(jié)炎、多聚糖蛋白誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎以及佐劑角叉菜膠誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎等。選擇的動(dòng)物一般為嚙齒類和靈長(zhǎng)類。一般認(rèn)為，佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠和膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎小鼠是研究RA、篩選抗炎免疫藥物的理想模型。大鼠和小鼠肢

7、體細(xì)小，對(duì)MRI硬件要求高(高分辨、高場(chǎng)強(qiáng))，限制了其在常規(guī)MRI研究中的應(yīng)用。Dawson等以甲基化小牛血清蛋白(methylatedbovineserumalbumin，mBSA)誘導(dǎo)兔膝關(guān)節(jié)AA模型獲得成功，此模型對(duì)MRI成像要求不高，而且是誘導(dǎo)單側(cè)膝關(guān)節(jié)炎癥，可以自身對(duì)比，特別適于MR研究。 本文即參考Dawson等介紹的方法，在建立兔膝抗原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(Antigeninducedarthritis，AA)模型的基礎(chǔ)上

8、，利用USPIO納米粒子對(duì)比劑標(biāo)記滑膜巨噬細(xì)胞后行MR成像，旨在探討納米鐵MRI評(píng)價(jià)滑膜巨噬細(xì)胞的活性的可行性及其引起的MR信號(hào)變化特征；優(yōu)選出理想的MRI掃描序列；觀察醋酸潑尼松干預(yù)后滑膜巨噬細(xì)胞的活性及其MR信號(hào)改變。 材料與方法：15只雌性大耳白兔，右膝關(guān)節(jié)腔注入甲基化小牛血清蛋白(0.5mlmBSA，2mg/ml)誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎模型，左膝關(guān)節(jié)注入等量生理鹽水作為對(duì)照。模型組分為2個(gè)亞組：炎癥組(9只)和潑尼松干預(yù)組(6只)。

9、另選3只制成假模型組。模型成功后9—28天(平均21.3天)經(jīng)靜脈注入U(xiǎn)SPIO(0.3mi/kg體重)，炎癥組分別于增強(qiáng)前、增強(qiáng)后24h行MR掃描，各有2只分別于48h、72h行MR掃描；潑尼松干預(yù)組分別于口服醋酸潑尼松第3、7、10天注射USPIO，于注射前、后24hMR掃描。掃描方案包括T1WI，F(xiàn)SET2WI，STIR，GRET2*WI。分析不同序列滑膜SNR在注射USPIO后24h、48h和72h的變化趨勢(shì)，繪制時(shí)間信號(hào)曲線。

10、將病變滑膜增強(qiáng)前信號(hào)強(qiáng)度與增強(qiáng)后信號(hào)強(qiáng)度行配對(duì)t檢驗(yàn)。分別比較醋酸潑尼松治療后第3、7、10天病變滑膜增強(qiáng)前信號(hào)強(qiáng)度與增強(qiáng)后信號(hào)強(qiáng)度，行配對(duì)t檢驗(yàn)。將潑尼松干預(yù)組d3、d7、d10模型與炎癥組模型右膝滑膜厚度、右膝滑膜△SNR分別進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。并與病理結(jié)果對(duì)照。 結(jié)果：15只大白兔右膝關(guān)節(jié)炎模型全部誘導(dǎo)成功。(1)炎癥組：病理顯示滑膜增生，血管翳形成，有大量吞噬USPIO的滑膜巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)；MRI示滑膜增厚，厚度為2.07

11、±O.97mm(范圍1.33～3.50mm)，呈稍長(zhǎng)或等T1、長(zhǎng)T2信號(hào)，STIR和GRET2*WI序列呈稍高信號(hào)；關(guān)節(jié)囊積液，呈長(zhǎng)T1、長(zhǎng)T2信號(hào)，STIR和GRE序列呈T2*高信號(hào)。注射USPIO后24h，T1信號(hào)升高(41.91％)，T2和T2*信號(hào)下降(分別為34.92％和57.24％)，各序列增強(qiáng)前后信號(hào)變化存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜O.05)。注射USPIO后24h，各序列信號(hào)強(qiáng)度變化最明顯。(2)潑尼松干預(yù)組：口服潑尼松第3天，

12、各序列增強(qiáng)前后右膝滑膜信號(hào)變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，病理提示大量巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，大量鐵微粒沉積；第7天，僅T1WI序列增強(qiáng)前后右膝滑膜信號(hào)變化存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，病理仍可見(jiàn)較多巨噬細(xì)胞及較多鐵微粒；第10天，F(xiàn)SET2WI及GRET2*WI增強(qiáng)前后右膝滑膜信號(hào)變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)，病理見(jiàn)少量巨噬細(xì)胞和鐵微粒。(3)潑尼松干預(yù)組d3、d7、d10模型與炎癥組模型右膝滑膜厚度之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與炎癥組右膝滑膜△SNR比較，

13、潑尼松干預(yù)3d模型，3種序列上(T1WI,T2WI及T2*WI)右膝滑膜△SNR與炎癥組右膝滑膜△SNR間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；潑尼松干預(yù)7d模型，T1WI上右膝滑膜△SNR與炎癥組右膝滑膜△SNR間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，T2WI、T2*WI上右膝滑膜△SNR與炎癥組右膝滑膜△SNR間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(分別為p=0.027，p=0.039)；潑尼松干預(yù)10d模型，T1WI上右膝滑膜△SNR與炎癥組右膝滑膜△SNR間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，T2WI、T2

14、*WI上右膝滑膜△SNR與炎癥組右膝滑膜△SNR間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(分別為p=0.041，p=0.047)。(4)模型組左膝關(guān)節(jié)及假模型組雙膝關(guān)節(jié)滑膜正常，關(guān)節(jié)囊無(wú)明顯積液。 結(jié)論：1.納米鐵MRI巨噬細(xì)胞成像是可行的，USPIO能較特異性地標(biāo)記滑膜巨噬細(xì)胞； 2.滑膜巨噬細(xì)胞吞噬氧化鐵粒子是引起MRI信號(hào)改變的基礎(chǔ)； 3.梯度回波序列T2*WI是USPIO標(biāo)記MRI巨噬細(xì)胞成像的最佳序列； 4.USPIO