黃芪甲苷對H2O2誘導的PC12細胞保護作用研究.pdf

1、目的：本實驗通過建立H2O2誘導的PC12細胞氧化應激損傷體外模型，觀察黃芪甲苷（Astragaloside IV，AsIV）對H2O2誘導的PC12細胞中 t-Akt、p-Akt、t-eNOS、p-eNOS表達的影響，探討黃芪甲苷是否可以通過激活PI3K-Akt-eNOS信號通路對H2O2誘導的PC12細胞起到抗氧化應激，抗凋亡的保護作用。
　　方法：應用四甲基偶氮噻唑藍比色（MTT）法檢測不同濃度 H2O2對 PC12細胞作用

2、不同時間的細胞存活率，篩選出合適的作用濃度與作用時間，建立氧化應激損傷模型。應用 MTT法檢測不同濃度的黃芪甲苷單獨作用 PC12細胞和分別作用于氧化模型的PC12細胞的存活率，篩選出合適的黃芪甲苷濃度后，將細胞進一步分成四組：正常對照組、H2O2模型組、黃芪甲苷+H2O2組、LY294002+黃芪甲苷+H2O2組。應用乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒測定LDH含量，Western blot法檢測細胞凋亡相關蛋白Caspase-3，通路相關蛋

3、白t-Akt、p-Akt、t-eNOS、p-eNOS的表達情況。
　　結果：1、MTT法檢測細胞存活率結果：與正常對照組相比，黃芪甲苷濃度在10~400nmol/L組單獨作用于 PC12細胞，對細胞存活率無明顯影響作用；PC12細胞活力與H2O2濃度及其作用的時間呈負相關。各實驗組PC12細胞活力隨H2O2濃度增大而下降，隨作用時間延長而下降。其中300μmol/L H2O2組，當作用時間為4h時細胞活力下降約為53％，達到PC1

4、2半數致死量，因此選取300μmol/L H2O2作用4h制建立 H2O2誘導的PC12細胞氧化應激損傷模型。不同濃度黃芪甲苷（100nmol/L、200nmol/L、400nmol/L）預處理組與 H2O2模型組相比，PC12細胞存活率均有所提高，而以黃芪甲苷（100nmol/L）處理組作用最為顯著(P＜0.05)。2、LDH測定結果：與正常對照組相比，H2O2模型組中PC12細胞上清液中LDH活性明顯升高（P＜0.05），對細胞具有

5、明顯的損傷作用；與H2O2模型組相比，在黃芪甲苷+H2O2組中，黃芪甲苷預處理降低H2O2誘導的PC12細胞上清液中LDH含量（P＜0.05），減少細胞損傷；與黃芪甲苷預處理組（黃芪甲苷+H2O2組）相比，在LY294002+黃芪甲苷+H2O2組中，黃芪甲苷預處理前用LY294002處理后使H2O2誘導的PC12細胞上清中LDH含量上升（P＜0.05）。3、western blot法檢測結果：與正常對照組相比，H2O2模型組中凋亡相關蛋

6、白 Caspase-3的表達明顯增高（P＜0.05），促進了細胞凋亡的發(fā)生；與 H2O2模型組相比，在黃芪甲苷+H2O2組中，黃芪甲苷預處理能顯著減少H2O2誘導的PC12細胞中凋亡相關蛋白Caspase-3的表達，抑制凋亡的進展（P＜0.05），能明顯上調Akt及eNOS磷酸化表達（P＜0.05）；與黃芪甲苷預處理組（黃芪甲苷+H2O2組）相比，在 LY294002+黃芪甲苷+H2O2組中，黃芪甲苷預處理前用LY294002處理后H2

7、O2誘導的PC12細胞能夠明顯抑制 Akt及 eNOS磷酸化表達（P＜0.05），提示黃芪甲苷可能通過激活 PI3K-Akt-eNOS信號通路發(fā)揮抗氧化應激、抗凋亡作用的。
　　結論：黃芪甲苷預處理對 H2O2誘導的PC12細胞氧化應激損傷具有保護作用，其作用機制可能與激活PI3K-Akt-eNOS信號通路密切相關。
　　目的：本實驗通過建立 H2O2誘導的PC12細胞氧化應激損傷體外模型，觀察黃芪甲苷（Astragalos

8、ide IV，AsIV）對 H2O2誘導的PC12細胞中 t-Akt、p-Akt、t-eNOS、p-eNOS表達的影響，探討黃芪甲苷是否可以通過激活 PI3K-Akt-eNOS信號通路對H2O2誘導的PC12細胞起到抗氧化應激，抗凋亡的保護作用。
　　方法：應用四甲基偶氮噻唑藍比色（MTT）法檢測不同濃度 H2O2對 PC12細胞作用不同時間的細胞存活率，篩選出合適的作用濃度與作用時間，建立氧化應激損傷模型。應用 MTT法檢測不同

9、濃度的黃芪甲苷單獨作用 PC12細胞和分別作用于氧化模型的PC12細胞的存活率，篩選出合適的黃芪甲苷濃度后，將細胞進一步分成四組：正常對照組、H2O2模型組、黃芪甲苷+H2O2組、LY294002+黃芪甲苷+H2O2組。應用乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒測定LDH含量，Western blot法檢測細胞凋亡相關蛋白Caspase-3，通路相關蛋白t-Akt、p-Akt、t-eNOS、p-eNOS的表達情況。
　　結果：1、MTT法檢測

10、細胞存活率結果：與正常對照組相比，黃芪甲苷濃度在10~400nmol/L組單獨作用于 PC12細胞，對細胞存活率無明顯影響作用；PC12細胞活力與H2O2濃度及其作用的時間呈負相關。各實驗組PC12細胞活力隨H2O2濃度增大而下降，隨作用時間延長而下降。其中300μmol/L H2O2組，當作用時間為4h時細胞活力下降約為53%，達到PC12半數致死量，因此選取300μmol/L H2O2作用4h制建立 H2O2誘導的PC12細胞氧化應

11、激損傷模型。不同濃度黃芪甲苷（100nmol/L、200nmol/L、400nmol/L）預處理組與 H2O2模型組相比，PC12細胞存活率均有所提高，而以黃芪甲苷（100nmol/L）處理組作用最為顯著(P＜0.05)。2、LDH測定結果：與正常對照組相比，H2O2模型組中PC12細胞上清液中LDH活性明顯升高（P＜0.05），對細胞具有明顯的損傷作用；與H2O2模型組相比，在黃芪甲苷+H2O2組中，黃芪甲苷預處理降低H2O2誘導的P

12、C12細胞上清液中LDH含量（P＜0.05），減少細胞損傷；與黃芪甲苷預處理組（黃芪甲苷+H2O2組）相比，在LY294002+黃芪甲苷+H2O2組中，黃芪甲苷預處理前用LY294002處理后使H2O2誘導的PC12細胞上清中LDH含量上升（P＜0.05）。3、western blot法檢測結果：與正常對照組相比，H2O2模型組中凋亡相關蛋白 Caspase-3的表達明顯增高（P＜0.05），促進了細胞凋亡的發(fā)生；與 H2O2模型組相比

13、，在黃芪甲苷+H2O2組中，黃芪甲苷預處理能顯著減少H2O2誘導的PC12細胞中凋亡相關蛋白Caspase-3的表達，抑制凋亡的進展（P＜0.05），能明顯上調Akt及eNOS磷酸化表達（P＜0.05）；與黃芪甲苷預處理組（黃芪甲苷+H2O2組）相比，在 LY294002+黃芪甲苷+H2O2組中，黃芪甲苷預處理前用LY294002處理后H2O2誘導的PC12細胞能夠明顯抑制 Akt及 eNOS磷酸化表達（P＜0.05），提示黃芪甲苷可能