不同濃度的白消安對樹鼩精子發(fā)生過程的影響.pdf

1、樹鼩是新興的實(shí)驗動物，在進(jìn)化地位及生理生化特征上較嚙齒類更加接近于靈長類。而且樹鼩有很多優(yōu)點(diǎn)，例如它的繁殖周期短，生長發(fā)育周期快，相對于大型靈長類動物其使用價格便宜。這些特征使樹鼩在生物醫(yī)學(xué)研究中較非人靈長類模型動物獼猴有更高的實(shí)用性和更大的發(fā)展?jié)摿Α，F(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究中，轉(zhuǎn)基因技術(shù)是建立疾病動物模型的重要和常用手段。目前還沒有關(guān)于轉(zhuǎn)基因樹鼩的研究報道，而建立樹鼩基因操作平臺對于推動樹鼩在生物醫(yī)學(xué)研究中的廣泛應(yīng)用具有決定意義。建立轉(zhuǎn)基因動

2、物模型的方法有多種，而此項研究主要是針對精原干細(xì)胞移植這一方面人手。利用精原干細(xì)胞移植方法建立轉(zhuǎn)基因動物，首先要清除移植受體自身的生殖細(xì)胞（包括精原干細(xì)胞及分化的生殖細(xì)胞），然后再將供體精原干細(xì)胞移植到生精作用受損的受體睪丸曲細(xì)精管中，曲細(xì)精管內(nèi)環(huán)境可以有效地刺激移植精原干細(xì)胞增殖、分化產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因精子。雄性生殖細(xì)胞的發(fā)生和發(fā)育受年齡和激素調(diào)控，青春期前完整的生精過程尚未發(fā)生，睪丸曲細(xì)精管的主要細(xì)胞構(gòu)成為支持細(xì)胞，精原干細(xì)胞，以及由精原干

3、細(xì)胞通過有絲分裂形成的精母細(xì)胞。青春期到來后，曲細(xì)精管即開始連續(xù)的生精過程，產(chǎn)生很多分化成熟的細(xì)胞。有幾種方法可以消除精原干細(xì)胞移植時受體的內(nèi)源性精子發(fā)生，在有關(guān)哺乳動物的實(shí)驗中，一般采用化學(xué)處理的方法，即白消安這種烷化劑處理。。白消安又稱馬利蘭，屬氮芥類烷化劑，化學(xué)名為1，4一丁二醇二甲磺酸酯，是甲基磺酸酯類的代表藥物。它也是慢性粒細(xì)胞白血病的傳統(tǒng)化療藥物以及造血干細(xì)胞移植預(yù)處理中最常用的藥物。但隨著該藥物的廣泛使用，發(fā)現(xiàn)長期服用該藥

4、物的男性出現(xiàn)不育現(xiàn)象。白消安能特異殺傷精原干細(xì)胞，但對于內(nèi)環(huán)境中的支持細(xì)胞損傷較小，內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定有助于精原干細(xì)胞的恢復(fù)，可以用于制作精原干細(xì)胞移植受體。在小鼠中，使用白消安制備精原干細(xì)胞移植受體已是非常成熟的技術(shù)，也有人使用白消安制備精原干細(xì)胞移植用的受體大鼠及獼猴。不同物種中白消安的使用劑量有很大差異，對于小鼠來說需要注射大約30 mg/kg才能有效去除內(nèi)源精原干細(xì)胞，大鼠中的劑量約為15 mg/kg，而獼猴注射8-12 mg/kg就

5、可使精子發(fā)生細(xì)胞產(chǎn)生不可恢復(fù)的損傷。目前樹鼩沒有關(guān)于這個方面的研究進(jìn)展，而這篇文章主要研究目的，根據(jù)白消安對樹鼩睪丸生精功能影響的劑量-時間-效應(yīng)關(guān)系，探討白消安用于制備雄樹鼩長期不育模型和精原干細(xì)胞移植受體模型的最佳劑量。通過實(shí)驗結(jié)果，發(fā)現(xiàn)白消安的使用劑量越高，破壞精子生成需要的時間就越短，生精作用恢復(fù)需要的時間也越長，甚至有的可能無法恢復(fù)。但白消安的劑量效應(yīng)在個體間有較大差異，這可能與樹鼩年齡相關(guān)。在我們測試的7組劑量中，35 mg