全人源抗CCR7噬菌體單鏈抗體的篩選及初步鑒定.pdf

1、目的：從噬菌體抗體庫中篩選抗CCR7單鏈融合抗體，并對其性能進行初步檢測。
　　 方法：PCR檢測大腸桿菌中ScFv基因插入率；1％瓊脂糖凝膠電泳鑒定SfiⅠ和NotⅠ雙酶切質(zhì)粒的結(jié)果；分別以乳腺癌細胞MDA-MB-435s細胞及CCR-7多肽片段為靶抗原對抗體庫進行4輪和3輪篩選富集。將陽性克隆轉(zhuǎn)化E.coli HB2151進行可溶表達?？贵w親和層析純化后，Western-blot結(jié)果顯示獲得抗體相對分子質(zhì)量為34 kd左右。

2、免疫細胞化學、免疫組織化學檢測與放射免疫顯像均證實單鏈抗體與表達CCR7的乳腺癌細胞特異性結(jié)合。人工基底膜穿透實驗檢測131Ⅰ標記scFv抗體對CCR7抗原表達陽性乳腺癌細胞侵襲能力的影響。
　　 結(jié)果：ScFv基因插入率為90％（18/20），雙酶切鑒定檢測到目的條帶。經(jīng)4輪細胞篩選，3輪抗原篩選抗CCR7抗原的噬菌體抗體得到了明顯富集，在E.coli HB2151中實現(xiàn)可溶表達。Western-blot結(jié)果顯示獲得抗體相對分