鐵調(diào)素對小鼠成骨細胞(MC3T3-E1)成骨活性基因表達的影響.pdf

1、隨著我國“老齡化”的進程不斷加快,骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病率愈來愈高。骨質(zhì)疏松癥是以骨組織顯微結(jié)構(gòu)受損,骨礦成分和骨基質(zhì)等比例不斷減少,骨質(zhì)變薄,骨小梁數(shù)量減少,骨脆性增加和骨折危險度升高的一種全身骨代謝障礙的疾病。對于鐵代謝與骨代謝相關(guān)性研究始于21世紀初,國外學者研究主要基于:①在各種鐵代謝疾病患者中發(fā)現(xiàn)伴有骨代謝異常；②骨質(zhì)疏松患者伴有鐵代謝異常。目前已發(fā)現(xiàn)骨質(zhì)疏松癥與體內(nèi)“鐵過載”關(guān)系十分密切。
　　 近幾年關(guān)于鐵代謝與骨代謝的

2、研究越來越受到重視。而作為鐵代謝的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因素:鐵調(diào)素(Hepcidin),是近期發(fā)現(xiàn)的一種新型的由肝臟合成的小分子肽類激素,是機體鐵穩(wěn)態(tài)的主要調(diào)控者,主要在肝細胞中合成,之后分泌至血液將體內(nèi)鐵需要的信號傳至小腸,調(diào)控腸鐵的吸收。
　　 本課題中運用鐵調(diào)素干預成骨細胞,觀察細胞的增殖活性情況及成骨細胞功能基因骨鈣素及骨保護素的變化。為進一步闡明鐵的穩(wěn)態(tài)對于骨代謝紊亂疾病如骨質(zhì)疏松的影響,提供實驗依據(jù)。本研究主要分為以下三個部分:

3、
　　 第一部分：
　　 目的:研究鐵調(diào)素對小鼠成骨細胞MC3T3-E1細胞活性的影響。方法:小鼠MC3T3-E1細胞體外培養(yǎng)后,以不同濃度的鐵調(diào)素及Fe3+供體枸櫞酸鐵銨(FAC)、去鐵胺(DFO)分別作用24h、48h、72h,用MTT方法檢測成骨細胞的增殖情況。結(jié)果:MTT檢測顯示在不同濃度鐵調(diào)素干預后,隨著培養(yǎng)液鐵調(diào)素的增高,細胞生長呈上升趨勢,差異具有統(tǒng)計意義(P<0.05)。在培養(yǎng)液DFO濃度增高時,細胞生長

4、呈上升趨勢(P<0.05)。在培養(yǎng)液FAC濃度增高時,細胞生長呈顯著性下降(P<0.05)。結(jié)論:鐵調(diào)素促進細胞增殖,DFO同樣促進細胞增殖,而高濃度鐵劑(FAC)可抑制細胞生長、增殖,結(jié)果顯示有濃度依賴性。
　　 第二部分：
　　 目的:研究鐵調(diào)素對小鼠成骨細胞MC3T3-E1細胞骨保護素(OPG)和骨鈣素(BGP)基因表達的影響。方法:小鼠MC3T3-E1細胞體外培養(yǎng)后,以不同濃度(100nmol/ml,200nmo

5、l/ml,300nmol/ml)的鐵調(diào)素作用72h,用RT-PCR方法檢測OPG、BGP mRNA的表達水平。結(jié)果:RT-PCR檢測顯示在不同濃度鐵調(diào)素干預后,各組均有OPG mRNA和BGPmRNA表達；不同濃度組的OPG mRNA和BGP mRNA表達光密度比值不同,組間密度比值比較存在顯著性差異(P<0.05)。結(jié)論:鐵調(diào)素可上調(diào)MC3T3-E1細胞OPG及BGP mRNA表達,鐵調(diào)素濃度增加轉(zhuǎn)錄水平逐漸增加,結(jié)果顯示有濃度依賴性

6、。
　　 第三部分：
　　 目的:研究去鐵胺(DFO)對小鼠成骨細胞MC3T3-E1細胞骨保護素(OPG)和骨鈣素(BGP)基因表達的影響。方法:小鼠MC3T3-E1細胞體外培養(yǎng)后,以不同濃度(50μmol/L,100μmol/L)的去鐵胺作用48h,用RT-PCR方法檢測OPG、BGP mRNA的表達水平。結(jié)果:RT-PCR檢測顯示在不同濃度去鐵胺干預后,各組均有OPG mRNA和BGPmRNA表達；不同濃度組的OPG