先天性巨結(jié)腸癥中Neuroligin2基因的表達(dá)及相關(guān)血漿GABA臨床意義.pdf

1、目的:先天性巨結(jié)腸(Hirschsprung's Disease，HD)，是病變腸管神經(jīng)節(jié)細(xì)胞缺如的一種先天性消化道發(fā)育畸形。目前雖然對HD發(fā)病機制的基礎(chǔ)性研究很多，如RET、SOX10、EDNRB等，但仍不能解釋所有患兒的發(fā)病機制。Neuroligin2基因存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)(Central Nervous System，CNS)，對突觸的形成、發(fā)育以及突觸功能循環(huán)具有重要的作用，且腸神經(jīng)系統(tǒng)(Enteric NervousSyste

2、m，ENS)與CNS是有密切關(guān)聯(lián)的。據(jù)此，本文研究HD患兒各段腸管中Neuroligin2基因的表達(dá)情況，探討Neuroligin2基因表達(dá)與HD發(fā)生的可能關(guān)系。已證實，Neuroligin2基因在CNS表達(dá)于γ-氨基丁酸(Gamma-Aminobutyric Acid，GABA)能神經(jīng)元，且GABA能反應(yīng)Neuroligin2的表達(dá)水平，臨床上對HD的診斷缺乏血液學(xué)檢查指標(biāo)，血漿GABA可能為HD新的診斷方法，本文探索HD患兒血漿GA

3、BA表達(dá)水平及對臨床診斷的意義。
　　方法:選取山東大學(xué)齊魯醫(yī)院小兒外科行手術(shù)治療的52例HD患兒切除病變結(jié)腸及血漿作為研究標(biāo)本，52例腹股溝斜疝(Indirect Inguinal Hernia，IIH)患兒的血漿作為研究對照。應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色、Western blot及實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)方法觀察Neuroligin2在各腸段的表達(dá)情況，應(yīng)用ELISA實驗方法測量血漿中GABA的表達(dá)水平。
　

4、　結(jié)果:Western blotting結(jié)果示Neuroligin2蛋白在狹窄段相對表達(dá)量為0.012±0.0011，明顯少于移行段和擴張段(0.039±0.0014，0.057±0.0018;P＜0.05)。qRT-PCR結(jié)果顯示Neuroligin2基因的mRNA水平與蛋白表達(dá)趨勢一致。免疫組織化學(xué)染色示HD患兒擴張段腸管的肌間腸神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中有Neuroligin2強陽性表達(dá)，而在狹窄段弱陽性表達(dá)，移行段可見Neuroligin2陽