KLF4抑制人肝星形細胞LX-2增殖及活化作用研究.pdf

1、目的：肝星形細胞（Hepatic stellate cell，HSC）是肝纖維化進程的核心環(huán)節(jié)，早期肝纖維化尚可逆轉至正常，此逆轉過程與肝星形細胞的狀態(tài)密切相關。KLF4已被證明在多種生理和病理過程中發(fā)揮基礎性作用。本實驗通過研究Krüppel樣因子4（Krüppel-like factor4，KFL4）對人肝星形細胞LX-2細胞增殖能力、細胞凋亡以及對HSC靜息活化狀態(tài)表型的影響，探討KLF4在維持肝星形細胞靜息狀態(tài)中的作用，為肝纖維

2、化的診治和預后判斷提供理論依據(jù)。
　　方法：設計KLF4慢病毒載體及KLF4shRNA慢病毒載體,利用慢病毒轉染技術上調和沉默LX-2細胞KLF4表達，篩選轉然后穩(wěn)定過表達和低表達KLF4的LX-2細胞進行平板克隆、CCK8實驗檢測細胞增殖活性；通過流式細胞技術檢測穩(wěn)定過表達和低表達KLF4的LX-2細胞凋亡率；通過流式細胞技術檢測穩(wěn)定過表達KLF4的LX-2細胞細胞周期分布；通過Western-blot技術檢測穩(wěn)定過表達KLF4

3、的LX-2細胞HSC靜息及活化狀態(tài)各指標。
　　結果：體外TGF-β誘導培養(yǎng)LX-2細胞24h后，KLF4mRNA水平顯著性下調（P<0.05）；上調KLF4，LX-2細胞增殖能力顯著性下降（P<0.05）,G0-G1期細胞顯著增加（P<0.05），S期細胞顯著減少（P<0.05），細胞凋亡顯著性減少（P<0.05），靜息狀態(tài)HSC標志物E-cadherin、ZO-1顯著性上調（P<0.05），活化狀態(tài)HSC標志物N-cadher