模擬微重力效應對MAD2沉默后人骨肉瘤細胞增殖的影響.pdf

1、MAD2是一種紡錘體組裝檢驗點蛋白，其功能是檢測染色體動粒與紡錘體微管的連接進而控制有絲分裂的運行。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)在模擬微重力條件下培養(yǎng)的人骨肉瘤細胞中MAD2升高、紡錘體多極率上升、細胞周期發(fā)生阻滯。
　　為了進一步研究MAD2的功能，本課題應用RNAi技術(shù)特異性沉默MAD2表達。首先，利用構(gòu)建的四種pSilencer4.1-MAD2-shRNA真核表達重組體轉(zhuǎn)染人骨肉瘤細胞系MG-63和U-2 OS。Western bl

2、ot檢測MAD2的表達情況，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染MAD2-shRNA-1和MAD2-shRNA-3重組體的細胞具有明顯的沉默效果。觀察地基條件下MAD2沉默后細胞增殖的改變，細胞生長曲線的測定結(jié)果表明，與對照組相比MAD2沉默后，人骨肉瘤細胞系MG-63和U-2 OS細胞生長均受到抑制。此外，利用流式細胞術(shù)檢測細胞周期變化情況，結(jié)果顯示與對照組相比 MAD2沉默后，U-2 OS中G2/M期的細胞比例明顯減少，S期的細胞比例增加，而MG-63的細胞周

3、期無明顯變化。同時DNA含量分析結(jié)果表明在MAD2沉默的U-2OS中多倍體細胞發(fā)生率明顯降低，而MG-63中多倍體細胞發(fā)生率并無明顯變化。
　　在此基礎(chǔ)上，為了探討模擬微重力效應對MAD2沉默后細胞增殖的影響，將封閉MAD2效果最好的重組體MAD2-shRNA1轉(zhuǎn)染MG-63和U-2OS細胞，利用回轉(zhuǎn)儀模擬微重力效應培養(yǎng)24h、48h和72h后，分析細胞周期和多倍體細胞發(fā)生率的變化情況。結(jié)果表明隨著模擬微重力培養(yǎng)時間的延長，MG-