骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞保護(hù)感光細(xì)胞的機(jī)制探討.pdf

1、目的：
　　研究大鼠視網(wǎng)膜強(qiáng)光照射后組織結(jié)構(gòu)和功能的變化；探討視網(wǎng)膜下腔移植BMSCs(Bone marrow mesenchymal stem cells，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞)對(duì)光損傷視網(wǎng)膜感光細(xì)胞的保護(hù)作用及可能的機(jī)制。
　　方法：
　　1.視網(wǎng)膜光損傷大鼠造模：將SD大鼠分別放入自制光照模具內(nèi)，以4kLux（kilo-Lux，千勒克斯）強(qiáng)光循環(huán)照射大鼠，分別持續(xù)3d（Day，天）、5d、7d、9d、12d后，于F-

2、ERG（Flash electroretinogram，閃光視網(wǎng)膜電圖）檢測(cè)后摘除眼球，行 HE（Hematoxin-eosion，蘇木-伊紅）染色，觀察大鼠視功能和視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)的變化情況。
　　2.視網(wǎng)膜下腔移植GFP-BMSCs（Green fluorescence protein-Bone marrow mesenchymal stem cells，表達(dá)綠色熒光蛋白的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞）：實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分成正常對(duì)照組、光損傷組

3、、DMEM（Dulbeccos modified eagles medium，改良必須培養(yǎng)基）組和BMSCs組。將3-5P的GFP-BMSCs和DMEM注射入光損傷視網(wǎng)膜下腔，分別于移植后第1w（Week，周）、4w、8w、12w行 F-ERG檢測(cè)后摘取眼球，TEM（Transmission electron microscope，透射電鏡）觀察感光細(xì)胞外節(jié)組織變化；免疫熒光染色觀察移植12w后，細(xì)胞遷移整合情況并比較各組 Rho（Rh

4、odopsin，視紫紅質(zhì)）殘余量；HE染色對(duì)比視網(wǎng)膜外核層厚度改變；蛋白印跡檢測(cè)光損傷后不同處理組第1d、3d、1w、2w、4w、6w、8w、12w的GS（Glutamine synthetase,谷氨酰胺合成酶）、GDNF(Glial cell line-derived neurotrophic factor,膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子)表達(dá)量變化。
　　結(jié)果：
　　1.F-ERG檢測(cè)顯示光暴露后，視網(wǎng)膜功能受損（p<0.0

5、5），外核層的厚度變薄(p<0.05)，二者均隨著光暴露時(shí)間延長(zhǎng)損傷加劇，功能和形態(tài)學(xué)改變表現(xiàn)出一致性。但光暴露5d以內(nèi)和9d以后，視網(wǎng)膜外核層厚度變薄的速度均較慢。
　　2.視網(wǎng)膜下腔移植GFP-BMSCs可延緩光損傷視網(wǎng)膜外核層厚度變?。╬<0.05）；F-ERG顯示BMSCs注射組視網(wǎng)膜功能較光損傷組和DMEM組明顯提高（p<0.05）；TEM觀察到BMSCs組的感光細(xì)胞外節(jié)結(jié)構(gòu)損傷較輕；免疫熒光染色觀察到GFP-BMSCs

6、僅極少量向外層視網(wǎng)膜組織遷移；BMSCs組Rho殘余量顯著高于光損傷組和DMEM組（p<0.05）；Western Blot檢測(cè)結(jié)果示：視網(wǎng)膜下腔注射組的GS在移植后第3d時(shí)降至最低，隨后進(jìn)行性升高到第2w，但BMSCs組的表達(dá)量始終高于其他光暴露組（p<0.05），GDNF在 BMSCs組的表達(dá)量亦較高，但其峰值在第1w時(shí)。
　　結(jié)論：
　　視網(wǎng)膜下腔移植GFP-BMSCs對(duì)光損傷視網(wǎng)膜的感光細(xì)胞有保護(hù)作用，移植的BMSC