糖化終末產(chǎn)物和脂多糖對胰島β細胞氧化應(yīng)激的影響.pdf

1、【目的】
　　 分別探討糖化終末產(chǎn)物（AGEs）對小鼠胰島細胞株MIN6和脂多糖（LPS）對大鼠胰島細胞株INS-1氧化應(yīng)激的影響。
　　 【方法】
　　 制備BSA-AGE，用不同濃度AGEs（100，200，400mg/L）干預(yù)MIN6細胞不同時間后，MTT比色法檢測細胞活力變化。以活性氧(ROS)捕獲劑雙氫-乙酰乙酸二氯熒光黃(DCFH-DA)孵育細胞，通過流式細胞儀檢測細胞內(nèi)二氯熒光黃(DCF)的熒光強度

2、而測得細胞內(nèi)ROS水平，并測定胰島素分泌的變化。
　　 分別用RT-PCR和Western blot方法檢測INS-1株上TLR4、促凋亡基因 Bax、抗凋亡基因Bcl-2的mRNA和蛋白表達；并用不同濃度LPS(0.01、0.1、1、5、10 mg/L)刺激INS-1細胞，CCK8法檢測細胞活力，流式細胞儀檢測細胞凋亡。
　　 【結(jié)果】
　　 隨著AGEs濃度的升高和作用時間的延長，MIN6細胞活力明顯下降（P

3、<0.05）。經(jīng)DCFH-DA孵育后流式細胞儀檢測顯示，AGEs處理組細胞內(nèi)DCF平均熒光強度較對照組明顯升高（P<0.05）。胰島素分泌量隨著AGEs濃度的增高和時間的延長，呈下降趨勢（P>0.05）。
　　 INS-1細胞經(jīng)RT-PCR擴增出TLR4基因，并經(jīng)Western blot方法檢測出TLR4蛋白表達；LPS刺激可上調(diào)TLR4的表達；在0.1～10 mg/L濃度范圍，LPS抑制細胞活力的作用呈劑量時間依賴性(P<0.

4、05)，經(jīng)抗TLR4抗體預(yù)處理后加入LPS刺激，細胞活力部分恢復(fù)（P<0.05）；LPS刺激可上調(diào)Bax/Bcl-2比值（P<0.05), α-硫辛酸作用可以下調(diào)Bax/Bcl-2比值（P<0.05)。流式細胞儀檢測LPS刺激后細胞凋亡稍有增加（P>0.05）。
　　 【結(jié)論】
　　 AGEs在一定濃度和時間范圍內(nèi)抑制MIN6活力，使細胞內(nèi)ROS生成增加，胰島素分泌量稍有下降。
　　 INS-1細胞上存在TLR4