單柱二維液相色譜復性變性溶菌酶及胰腺癌血清中腫瘤標志物的制備.pdf

1、高效液相色譜法是生物大分子分離純化的手段，也是蛋白復性的有效方法。液相色譜的核心是色譜填料，它在蛋白分離和蛋白折疊液相色譜(PFLC)中起著重大作用。本文主要研究了用單柱二維液相色譜填料分別在弱陽離子交換色譜(WCX)和疏水相互作用色譜(HIC)模式下對還原變性溶菌酶的復性，同時采用離線單柱二維液相色譜對蛋清中的蛋白進行了分離純化，以及采用SEC-RPLC制備胰腺癌血清中腫瘤標志物。主要包括以下4個部分。
　　 1文獻綜述：主要

2、介紹了二維液相色譜和單柱二維液相色譜的概念及應用，論述蛋白折疊液相色譜法的原理，總結了溶菌酶復性的研究進展及胰腺癌早期診斷的研究進展，其中共引用文獻64篇。
　　 2首次使用一根色譜柱分別在弱陽離子交換色譜(WCX)和疏水色譜(HIC)兩種模式下對還原變性溶菌酶的折疊進行了研究。詳細討論了在兩種分離模式下流動相中脲濃度，GSH/GSSG比例，pH，蛋白濃度及流動相流速對還原變性溶菌酶復性效率的影響。結果表明，使用此二維色譜柱，可

3、分別在WCX和HIC模式下實現(xiàn)對還原變性溶菌酶的復性。在WCX模式下復性時，在蛋白濃度高達40 mg/mL的條件下，得到活性回收率和質(zhì)量回收率分別為94.6％和96.0％，而在HIC模式下，蛋白濃度為5 mg/mL時，相應的活性回收率和質(zhì)量回收率分別為79.8％和96.1％。表明該二維色譜柱能夠應用于蛋白折疊液相色譜，可分別在WCX和HIC模式下對變性蛋白進行折疊。該二維色譜柱有望成為實現(xiàn)蛋白折疊液相色譜法的首選色譜柱。
　　

4、3首次使用一根色譜柱，采用離線單柱二維液相色譜技術對雞蛋清中的3種蛋白質(zhì)進行了的分離純化。第一維采用離子交換色譜模式，可一步分離純化得到抗生物素蛋白和溶菌酶，其純度分別達到95.3％和95.6％。將在離子交換模式下不保留的組分再通過疏水色譜模式進行第二維分離，通過條件優(yōu)化，一步可分離純化得到球蛋白G2，其純度可達到98.1％。而卵白蛋白和伴白蛋白則不能夠完全分離。結果表明，采用單柱二維液相色譜技術，利用一根色譜柱就可以完成對復雜樣品的二