FcαR的糖基化及其異形體的功能效應(yīng).pdf

1、本論文分為兩部分,第一部分研究了FcαR的糖基化對其與igA結(jié)合的影響；第二部分研究了Fcαr異形體的表達(dá)及定位。
　　 第一部分
　　 FcαR(CD89)是IgA的Fc受體,在IgA介導(dǎo)的免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用。FcαR是一個糖基化程度較高的蛋白質(zhì),它擁有六個潛在的N-糖基化位點。據(jù)文獻(xiàn)報道,FcαR的異常糖基化與HIV感染、酒精性肝硬化和IgA腎病等疾病相關(guān)。本實驗檢測了N-糖基化對FcαR與IgA結(jié)合所發(fā)揮的作用

2、。我們發(fā)現(xiàn)將穩(wěn)定表達(dá)FcαR的CHO細(xì)胞用衣霉素進(jìn)行去N-糖基化處理后,其與IgA的結(jié)合明顯增強(qiáng)。為了明確FcαR引起與IgA結(jié)合增強(qiáng)的N-糖基化位點,我們利用點突變的方法分別把六個N-糖基化位點的天門冬酰胺(N)替換成谷氨酰胺(Q)。流式細(xì)胞分析顯示N44、N120、N156、N165、N177位點去除糖基化不影響FcαR與IgA的結(jié)合,但是N58位點去除糖基化導(dǎo)致與IgA的結(jié)合顯著增加。相似的結(jié)果也表現(xiàn)在穩(wěn)定表達(dá)N58Q-FcαR的

3、RBL2H3細(xì)胞(大鼠嗜堿性白血病細(xì)胞系)。除此以外,我們還發(fā)現(xiàn)FcαR經(jīng)神經(jīng)氨酸酶處理去除唾液酸后,其與IgA的結(jié)合也明顯增強(qiáng),而N58正是這一現(xiàn)象中起關(guān)鍵作用的位點。綜上所述,我們的結(jié)果證明了N58位點的糖基化狀態(tài)影響了FcαR與IgA的結(jié)合。
　　 第二部分
　　 FcαR(本文代號為A1)是IgA的Fc受體,它在IgA介導(dǎo)的免疫應(yīng)答中發(fā)揮著重要作用。以前的研究證實,在人的髓系細(xì)胞可以檢測到Δ66EC2FcαR(代

4、號為A2)和△EC2 FcαR(代號為A3)的轉(zhuǎn)錄物,即EC2結(jié)構(gòu)域近膜端缺失66個核苷酸的轉(zhuǎn)錄物和缺失完整的免疫球蛋白樣EC2結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄物。我們的實驗主要研究了FcαR異形體(A2和A3)在CHO細(xì)胞、COS7細(xì)胞和RBL2H3細(xì)胞的表達(dá)和定位。與A1不同的是,A2和A3都不能在細(xì)胞表面表達(dá)。為了進(jìn)一步探討FcαR的胞外區(qū)影響其在細(xì)胞表面表達(dá)的氨基酸性質(zhì),我們構(gòu)建了多種FcαR的缺失突變體和置換突變體。結(jié)果顯示除第216位的蘇氨酸以