虎杖內生真菌與有效成分的相關性研究.pdf

1、虎杖為蓼科Polygonaceae植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.的干燥根及根莖。因其生態(tài)環(huán)境的差異，不同產地的藥材品質有別。品質的差異性與其微生態(tài)有著密切的關系，研究內生真菌與植物代謝之間的相關性可以揭示不同產地藥材產生差異性的原因，為虎杖的品質調控提供科學的依據。
　　通過對郫縣、都江堰市、巴州區(qū)、松潘縣4個不同地點以及根莖、莖、葉3個不同組織器官的虎杖進行內生真菌的分離，結果分離出

2、的167株內生真菌，經鑒定為2目4科27屬。從總數量上看，優(yōu)勢菌群為叢梗孢目(Moniliales)和黑盤孢目(Melanconiales);在科的水平優(yōu)勢菌群為叢梗孢科(Moniliaceae)和暗色孢科(Dematiaceae);在屬的分類水平上優(yōu)勢種群為曲霉屬(Aspergillus)、鐮孢屬（Fusarium）、地霉屬(Geotrichum)、膠帚霉屬(Gliocladium)。
　　取從郫縣、都江堰市、巴州區(qū)、松潘縣4地

3、點虎杖的根莖中分離的103株內生真菌進行液體發(fā)酵培養(yǎng)，采用TLC法、HPLC法對其次生代謝產物進行檢測，結果發(fā)現(xiàn):菌株G21、G33可產虎杖苷，效果明顯，其余7株代謝產物中也發(fā)現(xiàn)有虎杖苷;菌株G6-1、3-4-2可產大黃素，效果明顯，其余3株也可產大黃素;菌株G6-1、G24、12-2既可產虎杖苷又可產大黃素。最后篩選出相關內生真菌11株G24、12-2、G12-1、3-4-2、2-4-3、G21、G33、G38-2、G13-1、G6-

4、1、G1-1-2。
　　通過對虎杖愈傷組織誘導條件進行考察得:葉柄為虎杖愈傷組織誘導的最佳外植體，相應的最佳誘導培養(yǎng)激素為:Ⅱ MS+6-BA3.0mg/L+KT0.2mg/L+2，4-D0.5mg/L;應用Box-Benhnken設計對愈傷組織繼代增殖條件進行優(yōu)化，得出繼代最佳激素水平為:MS+6-BA1.9 mg/L+ KT0.4 mg/L+2，4-D0.5 mg/L。
　　通過內生真菌誘導子和虎杖懸浮細胞共培養(yǎng)，采用H

5、PLC法對共培養(yǎng)后細胞中虎杖苷和大黃素進行檢測發(fā)現(xiàn):
　　在共培養(yǎng)體系中，誘導子（菌株G6-1、G21、G13-1、12-2、3-4-2）使懸浮細胞中的虎杖苷含量增加，表明這些菌株作為誘導子可能會促進懸浮細胞中虎杖苷的合成，且誘導子（菌株G6-1、G21）對虎杖苷促進作用最明顯。誘導子（菌株G12-1、G33、G38-2、G1-1-2）使懸浮細胞中的虎杖苷含量減少，表明這些菌株作為誘導子可能會抑制懸浮細胞中虎杖苷的合成，且菌株G1

6、2-1、G33作用較明顯，分別使虎杖苷含量降低。誘導子（菌株2-4-3、G24）在虎杖懸浮愈傷組織中檢測不到虎杖苷，表明這類菌株可能會阻礙虎杖苷的合成過程。
　　在共培養(yǎng)體系中，誘導子（菌株2-4-3、G1-1-2、G24）使懸浮細胞中的大黃素含量增加，表明這些菌株作為誘導子可能會促進懸浮細胞中大黃素的合成，其中菌株2-4-3、G1-1-2促進作用最明顯。誘導子(菌株G33、G13-1、G38-2、3-4-2、G12-2、G21、