轉錄因子Sp3對Ki-67基因轉錄調控的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：明確轉錄因子Sp3對人宮頸癌細胞(Hela)、人胚腎細胞(HEK293)Ki-67基因啟動子的轉錄調控。
　　 方法：
　　 1.Sp3真核表達載體pCMV-Sp3作用于人宮頸癌細胞(Hela)、人胚腎細胞(HEK293)，用熒光定量PCR檢測Sp3的過表達對Ki-67mRNA的表達的影響，用雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)檢測Sp3的過表達對質粒pGL4-BK235啟動子轉錄活性的變化。
　　 2.Sp3小干擾

2、shRNA作用于人宮頸癌細胞(Hela)、人胚腎細胞(HEK293),用熒光定量PCR檢測Sp3的表達下降對Ki-67mRNA的表達的影響，用雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)檢測質粒pGL4-BK235啟動子轉錄活性的變化。
　　 3.將Sp3真核表達載體pCMV-Sp3及Sp1真核表達載體pN3-Sp1共轉染Hela細胞、HEK293細胞，用雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)檢測質粒pGL4-BK235啟動子轉錄活性的變化。
　　

3、結果：
　　 1．過表達轉錄因子Sp3顯著抑制Hela、HEK293細胞Ki-67mRNA表達水平(P＜0.05)，與pCMV-Sp3共轉染的質粒pGL4-BK235啟動子活性也有不同程度的降低，在Hela、HEK293兩種細胞中的啟動子活性分別為未行共轉染的BK235的55.8％、45.6％。
　　 2.Sp3 shRNA作用于Hela、HEK293細胞其Ki-67mRNA的表達量均有增加(P＜0.05)，與Sp3 s

4、hRNA共轉染的質粒pGL4-BK235啟動子活性也有不同程度增加。在Hela、HEK293細胞中分別升至未行共轉染的BK235的1.21倍、1.24倍。
　　 3.pCMV-Sp3與pN3-Sp1以不同比例共轉染于Hela、HEK293細胞，對質粒pGL4-BK235啟動子轉錄活性的影響是：Sp3與Sp1的比值下降誘導Ki-67基因的表達，比值升高抑制Ki-67基因的表達。
　　 結論：Sp3真核表達質粒pCMV-Sp

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