基質(zhì)硬度與轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β1協(xié)同作用對肝細胞(LO2)表型的影響.pdf

1、目的：本文通過建立與人體正常肝組織、肝纖維化中后期及末期生理硬度相似的體外培養(yǎng)模型，探究轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β1與基底硬度即理化協(xié)同作用對肝細胞表型改變的影響。
　　 方法：根據(jù)文獻資料，設(shè)計基底膜的硬度為3.6 kPa、10 kPa、30 kPa并建立體外培養(yǎng)模型。此三種硬度的基底膜分別對應正常肝組織和肝纖維化中后期及肝纖維化末期肝組織的硬度。通過TGF-β1濃度梯度實驗確定TGF-β1影響肝細胞表型改變的濃度拐點。測出其濃度

2、拐點后，采用形態(tài)學觀察、計算機圖像處理、免疫熒光顯微觀測、Western Blotting及RT-PCR實驗技術(shù)研究肝細胞在不同硬度梯度的聚丙烯酰胺基底膜上及TGF-β1處理組中細胞形態(tài)變化特征、骨架裝配方式、E-鈣粘素表達、白蛋白和alpha-平滑肌動蛋白表達的差別；其中E-cadherin、白蛋白是上皮樣細胞表型的標志性蛋白而α-平滑肌肌動蛋白是間充質(zhì)樣細胞表型的標志性蛋白。
　　 結(jié)果：72小時后，對照組中肝細胞的鋪展面積

3、及長短經(jīng)之比隨著基質(zhì)硬度的增大而增大，細胞骨架也由皮質(zhì)下環(huán)逐漸變?yōu)閼w維豐富且與細胞長軸平行的狀態(tài)。3.6 kPa TGF-β1處理組細胞骨架與其對照組相比沒有明顯的差異。但在10kPa、30 kPa基質(zhì)膜上TGF-β1的加入則進一步促進了骨架纖維的發(fā)育。WesternBlotting及RT-PCR的研究結(jié)果表明：無論是從蛋白水平還是DNA水平上來講E-cadherin、白蛋白的表達量隨著基質(zhì)硬度增加而逐漸減少，α-SMA的表達趨勢卻