Rho-ROCK信號通路對Tca8113增殖活性、遷移、黏附力及侵襲力的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、研究背景:
   在口腔頜面部腫瘤中,舌癌是常見的惡性腫瘤之一,生長迅速,早期淋巴轉(zhuǎn)移率高?;颊呔驮\時,腫瘤常已經(jīng)表現(xiàn)出較強的侵襲性。因舌體部位和功能的特殊性,手術(shù)治療常帶來發(fā)音或吞咽功能障礙,嚴重者容貌畸形,影響患者的身心健康,加之放、化療周期長,副作用大,患者術(shù)后生活質(zhì)量常明顯下降。目前,在求得手術(shù)治愈率提高的同時,為了進一步改善患者術(shù)后的生存質(zhì)量,分子水平的藥物治療已逐漸受到重視,越來越多的研究結(jié)果讓我們有希望看到分子治療

2、將成為腫瘤傳統(tǒng)治療方法的補充。Rho/ROCK信號通路是一個調(diào)節(jié)肌動蛋白和細胞骨架的重要通路,而細胞骨架廣泛參與細胞形態(tài)、細胞運動、物質(zhì)運輸、能量轉(zhuǎn)換、信號傳遞和細胞分化等與生命現(xiàn)象相關(guān)的活動過程。對該通路的研究將有助于口腔及腫瘤專家對舌癌侵襲機制的了解,并能對早期轉(zhuǎn)移做到及時治療。
   本實驗研究旨在通過應(yīng)用不同濃度的Y-27632--Rho/ROCK信號通路特異性抑制劑,作用于體外培養(yǎng)的人舌癌細胞株Tca8113,觀察該信

3、號轉(zhuǎn)導通路被阻斷后,細胞增殖活性、運動能力、侵襲能力的改變,分析其結(jié)果并探討作用機制,為舌癌的侵襲轉(zhuǎn)移的治療或控制提供一種思路,并為Y-27632的作用機制提供進一步的實驗依據(jù)。
   目的:
   應(yīng)用Rho/ROCK信號通路特異性抑制劑Y-27632,作用于體外培養(yǎng)的Tca8113細胞,探討Rho/ROCK信號通路對該細胞增殖、黏附和侵襲過程的作用機制。
   材料與方法:
   選取正常生長的Tca

4、8113細胞接種、消化、計數(shù),并繪制細胞生長曲線;用不同濃度的Rho/ROCK信號通路特異性抑制劑Y-27632(5μM、10μM、25μM、50μM)作用于體外培養(yǎng)的Tca8113細胞,MTT法檢測不同時間點細胞的增殖情況,計算抑制率;劃痕法測不同濃度藥物對細胞運動能力的影響;細胞體外黏附實驗觀察Y-27632對細胞黏附能力的影響;Transwell法檢測經(jīng)Y-27632預處理細胞的侵襲能力的改變。
   結(jié)果:
  

5、 1體外培養(yǎng)的Tca8113的生長曲線近似S形,符合一般細胞的生長規(guī)律。生長至第3天時細胞進入對數(shù)分裂期,可進行傳代培養(yǎng)或?qū)嶒灒坏?-8天時生長及分裂能力開始下降,形態(tài)變化,死亡細胞增多。
   2對照組的Tca8113細胞具有癌細胞的典型形態(tài)學特征。在倒置顯微鏡下呈“鋪路石”狀,細胞核大小不一,可呈圓形、卵圓形或腎形,核漿比例高,細胞排列緊密,細胞呈巢狀或片狀活躍生長;而加入Y-27632干預后,隨濃度的高低細胞出現(xiàn)不同程度的

6、形態(tài)及數(shù)量的變化。
   3相同時間,隨Y-27632濃度增大,Tca8113細胞490nm處吸光度值逐漸減小,具有劑量依賴趨勢,各實驗組之間OD值差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01),而且抑制率依次增大;相同濃度,隨Y-27632作用時間的延長,增殖抑制率相應(yīng)增高。
   4 Y-27632作用24h后的對照組細胞向劃痕中央?yún)^(qū)大量爬行,傷口邊緣的細胞將“突觸”伸向劃痕中央的空白區(qū),并依靠這種方式彼此緊密連接,爬行覆蓋傷口

7、的細胞增生活躍,間距很小,傷口模型愈合良好。實驗組細胞的爬行能力隨Y-27632濃度的增加而依次下降,劃痕傷口愈合不良,細胞呈抑制狀態(tài),排列稀疏,間距較大,表明Tca8113細胞經(jīng)Y-27632處理后運到能力受到負向影響。
   5對照組細胞與孔板黏附性能好,細胞數(shù)量多,形態(tài)飽滿,排列相對密集;而加入不同濃度的Y-27632預處理24h后,細胞黏附能力依次降低,OD值逐漸下降,25μM及50μM濃度組細胞數(shù)量明顯減少,排列稀疏,

8、呈“小黑點狀”。各濃度組之間OD值存在顯著差異,具有統(tǒng)計學意義(P<0.01),黏附率曲線呈下降趨勢。
   6 Y-27632預處理24h后的對照組細胞穿膜數(shù)量較多,隨抑制劑濃度增加,經(jīng)過處理的細胞變形能力逐漸減小,穿膜數(shù)量逐漸減少,50μM組為最少,各實驗組與對照組差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。對照組變形穿膜后的細胞仍呈圓球形,分布均勻密集,部分細胞穿膜后仍有很強的生長、增殖能力;而5μM、10μM組細胞變形能力相對減

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