PCR-反向斑點雜交技術在SLC25A13基因突變檢測中的應用研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:建立PCR-反向斑點雜交檢測SLC25A13基因突變Ⅰ、突變Ⅲ和突變X技術。 方法: 1．設計與合成SLC25A13基因突變Ⅰ、Ⅲ、X寡核苷酸探針。 2．選擇不同濃度探針、不同雜交溫度和不同洗膜溫度進行雜交檢測，探索最佳雜交條件。 3．應用已建立的反向斑點雜交技術檢測已知基因突變和未知基因突變患兒，并進行測序分析，觀察兩種檢測方法的結果符合率。 結果: 1．0．45μm孔徑尼龍膜、1

2、5-20pmol/μL探針濃度、42．5℃雜交溫度、42．5℃洗膜溫度雜交結果最理想。 2．100例已知突變組患兒用PCR-反向斑點雜交技術檢出突變Ⅰ純合子17例、Ⅰ/Ⅲ和Ⅲ/Ⅹ復合雜合子各1例，Ⅰ/Ⅹ復合雜合子2例，單條等位基因攜帶突變Ⅰ44例，單條等位基因攜帶突變Ⅲ和單條等位基因攜帶突變Ⅹ1例1人，與PCR-DNA直接測序法檢出結果一致，符合率100％。 3．50例未知突變組中，用PCR-反向斑點雜交技術共檢出突變Ⅰ

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