米諾環(huán)素對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf

1、背景：缺血性腦血管病具有高致殘率、高死亡率和高發(fā)病率，嚴(yán)重危害著人類的健康。米諾環(huán)素具有神經(jīng)保護(hù)作用，目前研究已經(jīng)證實(shí)其是通過抑制基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)、氧化氮類產(chǎn)物生成及自由基瀑布效應(yīng)等機(jī)制來發(fā)揮作用；但米諾環(huán)素是否通過對(duì)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)和谷氨酸(glutamate，Glu)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)的影響來發(fā)揮作用的，目前國(guó)內(nèi)外尚缺乏報(bào)道。
　　 目的：應(yīng)用米諾環(huán)素作

2、用于大鼠腦缺血-再灌注損傷模型，通過觀察腦梗死體積及GFAP、Glu陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)情況，進(jìn)一步探討米諾環(huán)素對(duì)損傷后腦保護(hù)的作用機(jī)制。
　　 方法：將120只雄性健康Sprague-Dawley大鼠，體重250～300g，隨機(jī)分為正常組(N)、假手術(shù)組(F)、缺血-再灌注組(IR)和米諾環(huán)素干預(yù)組(M)，每組再隨機(jī)分為4組，分別為：缺血2小時(shí)后再灌注6、12、24、48h組，6、24、48h每組6只，12h組12只，6只用于石蠟切

3、片，6只用于TTC染色。米諾環(huán)素干預(yù)組在缺血2小時(shí)再灌注時(shí)即刻給予米諾環(huán)素45mg/kg灌胃，以后每12小時(shí)追加22.5mg/kg；缺血組(IR)和假手術(shù)組(F)給予同等量0.9％生理鹽水灌胃。用線栓法制備大鼠左側(cè)大腦中動(dòng)脈閉塞(middle cerebral artery occlusion，MCAO)模型，模型成功后，分別在缺血2小時(shí)再灌注6、12、24、48h進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，后斷頭取腦。各12h組隨機(jī)取6只斷頭取新鮮腦組織進(jìn)行T

4、TC染色觀察梗死灶體積。余各組大鼠灌注固定后斷頭取腦，分別取視交叉前后2mm組織，再固定12小時(shí)，常規(guī)脫水、石蠟包埋及切片進(jìn)行HE染色觀察腦缺血-再灌注損傷的病理學(xué)改變，另行免疫組織化學(xué)染色觀察各時(shí)間點(diǎn)GFAP、Glu陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：1、神經(jīng)缺損癥狀及功能評(píng)分：正常組(N)、假手術(shù)組(F)均未見明顯神經(jīng)功能缺損癥狀，米諾環(huán)素干預(yù)組(M)、缺血再灌注組(IR)大鼠清醒后均出現(xiàn)不同程度的右側(cè)偏癱。米諾環(huán)素干預(yù)組(M

5、)各時(shí)間點(diǎn)大鼠神經(jīng)功能評(píng)分均較低于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)缺血再灌注組(IR)，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 2、TTC染色：假手術(shù)組(F)和正常組(N)均未見明顯梗死灶，米諾環(huán)素干預(yù)組(M)、缺血再灌注組(IR)均可見明顯不顯色梗死灶，米諾環(huán)素干預(yù)組(M)各時(shí)間點(diǎn)梗死灶體積均較缺血再灌注組(IR)相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)小，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 3、蘇木素-伊紅(HE)染色光鏡觀察：正常組(N)、假手術(shù)組(

6、F)腦組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，正常神經(jīng)元數(shù)量多，無壞死細(xì)胞；缺血再灌注組(R)缺血半暗帶區(qū)細(xì)胞數(shù)量明顯減少，缺血區(qū)淡染，組織結(jié)構(gòu)疏松，高倍鏡下可見大量神經(jīng)細(xì)胞變性壞死，大量空泡形成，正常神經(jīng)細(xì)胞幾乎消失；米諾環(huán)素干預(yù)組(M)缺血半暗帶區(qū)正常神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量較缺血再灌注組(IR)明顯增多。
　　 4、免疫組織化學(xué)染色：正常組和假手術(shù)組可見少量GFAP、Glu陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)；腦缺血再灌注組(IR)、米諾環(huán)素治療組(M)梗死區(qū)可見GFAP、Gl

7、u陽(yáng)性細(xì)胞的大量表達(dá)，以梗死灶周邊半暗帶區(qū)為主；與腦缺血再灌注組(IR)相比，米諾環(huán)素組(M)相應(yīng)各時(shí)間點(diǎn)GFAP陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)量減少，而Glu陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)亦較缺血組相應(yīng)各時(shí)間點(diǎn)明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：1、腦缺血再灌注早期給予米諾環(huán)素，可使腦缺血后神經(jīng)功能評(píng)分下降，梗死體積減小，神經(jīng)元壞死減少，提示米諾環(huán)素對(duì)腦缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用。
　　 2、腦缺血再灌注后GFAP、Glu陽(yáng)性