燈盞花素對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf

1、燈盞花素對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用目的：腦缺血再灌注可通過多種途徑導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載，誘發(fā)一系列級(jí)聯(lián)反應(yīng)，造成嚴(yán)重的遲發(fā)性神經(jīng)元損傷，影響患者的預(yù)后和功能恢復(fù)。研究表明，降低缺血再灌注鈣超載程度對(duì)腦組織有一定的保護(hù)作用。燈盞花素可通過影響腦組織的鈣含量，達(dá)到保護(hù)腦缺血再灌注腦組織損傷的作用。但具體的作用機(jī)制，特別是如何通過改變神經(jīng)細(xì)胞鈣離子通道，影響細(xì)胞內(nèi)鈣濃度等方面研究未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用膜片鉗等現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)，記錄全腦缺血再

2、灌注不同時(shí)間點(diǎn)，大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元L型Ca2+通道開放概率、開放時(shí)間和細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+濃度的變化，探討Ca2+超載的原因，并觀察不同濃度燈盞花素干預(yù)后，上述指標(biāo)的變化，揭示燈盞花素對(duì)腦缺血再灌注腦損傷保護(hù)作用的機(jī)理，以期對(duì)臨床用藥提供更合理、明確的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1.健康成年SD大鼠隨機(jī)分為正常組，缺血組，缺血再灌注組，燈盞花素低劑量組，燈盞花素高劑量組。采用改良Pulsinelli四血管閉塞法制作大鼠全腦缺血

3、模型，再灌注時(shí)間點(diǎn)為1.5h、3.0h、4.5h和6.0h。各組用急性分離的方法獲得大鼠單個(gè)海馬CA1區(qū)神經(jīng)元，采用膜片鉗技術(shù)細(xì)胞貼附法，記錄細(xì)胞膜L型Ca2+通道的單通道電流曲線，并用軟件分析通道的開放概率和開放時(shí)間。各組記錄指標(biāo)作如下處理： (1)對(duì)照分析正常組、缺血組、缺血再灌注組各灌注時(shí)間點(diǎn)L型Ca2+通道開放概率和開放時(shí)間變化。 (2)分析燈盞花素高、低劑量組用藥干預(yù)后缺血再灌注各灌注時(shí)間點(diǎn)L型Ca2+通道開放

4、概率和開放時(shí)間變化，并與缺血再灌注組各相應(yīng)的時(shí)間作比較。 2.健康成年SD大鼠隨機(jī)分為正常組；缺血再灌注組；燈盞花素高劑量組。采用改良Pulsinelli四血管閉塞法制作大鼠全腦缺血模型，再灌注時(shí)間點(diǎn)為1.5h、3.0h、4.5h和6.0h。急性分海馬CA1區(qū)神經(jīng)元，用Fura-2/AM熒光染色劑染色，用TillVision軟件進(jìn)行圖像分析，記錄340nm和380nm處熒光強(qiáng)度，除去自發(fā)熒光后計(jì)算出F340/F380比值，用此值

5、代表神經(jīng)元內(nèi)游離鈣離子濃度。記錄各組細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+濃度，并作如下分析。 (1)對(duì)正常組、缺血再灌注組各灌注點(diǎn)海馬神經(jīng)元內(nèi)Ca2+濃度的變化進(jìn)行對(duì)照分析。 (2)分析燈盞花素高劑量組用藥干預(yù)后缺血再灌注各灌注時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞內(nèi)Ca2+離子濃度的變化，并與缺血再灌注組各相應(yīng)的時(shí)間作比較。 結(jié)果： 1.全腦缺血再灌注各時(shí)間點(diǎn)海馬CA1區(qū)神經(jīng)元L型Ca2+通道開放概率和開放時(shí)間比正常組顯著增加(P＜0.01或0.0

6、5)。 2.燈盞花素低劑量組全腦缺血再灌注1.5h和3.0h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)海馬CA1區(qū)神經(jīng)元L型Ca2+通道開放概率為0.007±0.007和0.029±0.010，開放時(shí)間為9.867±5.932ms和17.327±7.136ms，兩者均比缺血再灌注組相應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)顯著減小(P＜0.01或0.05)。其余兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)沒有顯著變化。 3.燈盞花素高劑量組全腦缺血再灌注1.5h海馬CA1區(qū)神經(jīng)元L型Ca2+通道開放概率為0.017

7、±0.008，比缺血再灌注組相應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)顯著減小；開放時(shí)間在再灌注3.0h為15.815±5.684ms，比缺血再灌注組相應(yīng)的時(shí)間顯著減小(P＜0.05)。 4.全腦缺血再灌注1.5h、3.0h和4.5h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)海馬CA1區(qū)神經(jīng)元內(nèi)游離Ca2+濃度比正常組顯著升高(P＜0.01或0.05)；6.0h時(shí)間點(diǎn)變化不明顯。 5.燈盞花素高劑量組全腦缺血再灌注1.5h和4.5h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)海馬CA1區(qū)神經(jīng)元內(nèi)游離Ca2+濃度為8

8、57.847±70.925和886.462±38.900，比缺血再灌注組顯相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)著降低(P＜0.01)；其余兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)變化不明顯。 結(jié)論： 1.大鼠全腦缺血再灌注海馬CA1區(qū)神經(jīng)元L型Ca2+通道的開放概率和開放時(shí)間顯著增加，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載，誘發(fā)神經(jīng)元的損傷。 2.燈盞花素通過降低大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元L型Ca2+通道開放概率和縮短通道的開放時(shí)間，降低細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載，達(dá)到保護(hù)腦組織作用。