大黃素甲醚對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用.pdf

1、該研究在用線拴法堵塞大鼠大腦中動脈,建立鼠腦缺血再灌注模型的基礎(chǔ)上,利用放射免疫及免疫組織化學(xué)技術(shù)定量分析炎性細胞因子白細胞介素-1β(IL-1β)、細胞間粘附分子-1(ICAM-1)和Caspase-3在腦缺血再灌注后的表達變化,以探討其對腦缺血再灌注損傷的作用,以及大黃素甲醚對它們表達的影響,為臨床上大黃素甲醚的應(yīng)用提供實驗及理論依據(jù).1大黃素甲醚對大鼠腦缺血再灌注I L-1 β表達的影響目的:探討大黃素甲醚對大鼠腦缺血再灌注IL-

2、1 β表達的影響方法:成年健康雄性SD大鼠105只,隨機分為正常組∽orm),假手術(shù)組(Sham)和缺血再灌注組(Model):分為再灌注6小時、12小時、24小時、48小時各時段組,藥物對照組(NS)、小劑量(大黃素甲醚20mg/kg)藥物治療組(LD)、大劑量(大黃素甲醚40mg/kg)藥物治療組(HD)且每組又分為腦缺血再灌注12小時、24小時兩組,每組均為7只.該研究采用線栓法制備大鼠右側(cè)大腦中動脈腦缺血再灌注模型,尼龍絲線經(jīng)右

3、側(cè)頸內(nèi)動脈輕柔推進阻塞大腦中動脈,假手術(shù)組尼龍絲線進入頸內(nèi)動脈但不阻塞大腦中動脈.藥物治療組于缺血前48小時、24小時、術(shù)前將大黃素甲醚溶于2ml生理鹽水鼻飼,藥物對照組則僅鼻飼等量生理鹽水.實驗結(jié)束后斷頭處死取右側(cè)大腦半球研成勻漿,采用放射免疫分析法測定腦組織中IL-1β的含量.結(jié)果:該實驗局灶性腦缺血再灌注各個時間段腦組織IL-1 β含量明顯升高,經(jīng)單因素方差分析有顯著性差異(F=293.049,P<0.01),在時間和數(shù)值上保持一

4、致性,而且與相應(yīng)時間點的假手術(shù)組和正常組比較有顯著性差異(P<0.01).再灌注6小時達高峰(1.295±0.0352ng/ml,與假手術(shù)組比較P<0.01),隨之開始下降,在腦缺血再灌注48小時(0.9030±0.0212 ng/ml,P<0.01)仍處于較高的水平,假手術(shù)組和正常組比較沒有顯著性差異(P>0.05).大黃素甲醚治療組與相應(yīng)的藥物對照組比較病變側(cè)腦組織IL-1β含量降低,大劑量治療各組及小劑量治療組腦缺血再灌注12小時

5、有顯著性差異(P<0.01).結(jié)論:IL-1β在腦缺血再灌注損傷中起重要作用,大黃素甲醚通過抑制腦缺血再灌注IL-1β的表達,減輕腦缺血再灌注損傷.2大黃素甲醚對大鼠腦缺血再灌注I CAM-1和Caspase-3表達的影響目的:探討大黃素甲醚對大鼠腦缺血再灌注ICAM-1和Caspase-3表達的影響方法:成年健康雄性SD大鼠105只,隨機分為正常組,假手術(shù)組:分為再灌注6小時、12小時、24小時、48小時各時段組,缺血再灌注組:分為再

6、灌注6小時、12小時、24小時、48小時各時段組,藥物對照組、小劑量藥物治療組(大黃素甲醚20mg/kg)、大劑量藥物治療組(大黃素甲醚40mg/kg)且每組又分為腦缺血再灌注12小時、24小時兩組,每組均為7只.該研究采用線栓法制備大鼠右側(cè)大腦中動脈腦缺血再灌注模型,尼龍絲線經(jīng)右側(cè)頸內(nèi)動脈輕柔推進阻塞大腦中動脈,假手術(shù)組尼龍絲線進入頸內(nèi)動脈但不阻塞大腦中動脈.藥物治療組于缺血前48小時、24小時、術(shù)前將大黃素甲醚溶于2ml生理鹽水鼻飼

7、.藥物對照組則僅鼻飼等量生理鹽水.實驗結(jié)束取材,石蠟包埋,常規(guī)切片,HE染色和免疫組織化學(xué)染色檢測ICAM-1和Caspase-3蛋白表達.電鏡標本用2.5％戊二醛固定,鋨酸后固定,樹脂包埋,超薄切片,電鏡觀察并拍片.結(jié)果:(1)光鏡(HE染色):腦缺血再灌注各組均可見皮質(zhì)和紋狀體區(qū)出現(xiàn)細胞腫脹,胞漿嗜酸性變,細胞間隙增大,胞核碎裂、溶解、固縮,淋巴細胞和中性粒細胞浸潤,以再灌注24小時上述變化明顯.假手術(shù)組和正常組未見異常變化.大黃素

8、甲醚治療組上述變化減輕.假手術(shù)組和正常組未見異常變化.(2)電鏡:模型組神經(jīng)元細胞質(zhì)高度水腫,細胞器稀疏散在,電子密度減低,線粒體高度水腫,大部分嵴排列紊亂或消失,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張脫顆粒,部分神經(jīng)元細胞出現(xiàn)核染色質(zhì)邊集;正常組神經(jīng)元核膜圓形,規(guī)整,核仁大而明顯,胞漿內(nèi)可見各種細胞器,電子密度均一,細胞形態(tài)正常.(3)免疫組化結(jié)果:①ICAM-1:腦缺血再灌注各時間點病變側(cè)蛋白表達明顯增高,積分光密度值(F=15.707)和面密度值(F=1

9、8.343)經(jīng)單因素方差分析有顯著性差異(P<0.01),在時間上和數(shù)值上保持一致性,而且與相應(yīng)時間點的假手術(shù)各組和正常組比較有顯著性差異(P<0.01).腦缺血再灌注24小時達高峰(積分光密度值31.89±4.38,面密度值0.01 85±0.0031),腦缺血再灌注48小時仍持續(xù)高水平表達.大黃素甲醚治療組各組蛋白表達的積分光密度和面密度較同時段藥物對照組降低,且有顯著性差異(P<0.05或P<0.01).②Caspase-3:腦缺

10、血再灌注各時間點病變側(cè)蛋白表達明顯增高,積分光密度值(F=8.272)和面密度值(F=329.894)經(jīng)單因素方差分析有顯著性差異(P<0.01),在時間上和數(shù)值上保持一致性,而且與相應(yīng)時間點的假手術(shù)各組和正常組比較有顯著性差異(P<0.05或P<0.01).腦缺血再灌注24小時達高峰(積分光密度值15.44±3.38,面密度值0.01150±0.00035),腦缺血再灌注48小時仍持續(xù)高水平表達.大黃素甲醚治療組各組蛋白表達的積分光密

11、度和面密度較同時段藥物對照組降低,大劑量治療各組有顯著性差異(P<0.05或P<0.01).結(jié)論:腦缺血再灌注后ICAM-1和Caspase-3表達明顯升高,與腦缺血再灌注損傷密切相關(guān).大黃素甲醚通過抑制腦缺血再灌注后ICAM-1和Caspase-3表達,減輕再灌注損傷,起到腦保護作用.結(jié)論1.大黃素甲醚可通過血腦屏障,具有很強的抗炎作用.該實驗證實,大黃素甲醚在腦缺血再灌注早期即可拮抗缺血腦組織中IL-1β的合成和分泌,從而減輕IL-

12、1β所引起的一系列腦缺血損害,是治療缺血性腦血管病再灌注損傷的重要途徑.2.大黃素甲醚可下調(diào)腦缺血再灌注病變側(cè)神經(jīng)元和血管內(nèi)皮細胞ICAM-1的表達,減輕其所介導(dǎo)的白細胞粘附和浸潤,從而抑制腦缺血再灌注后腦組織的炎性反應(yīng),減輕腦組織再灌注損傷.3.半胱氨酸蛋白酶Caspase-3參與了腦缺血半暗帶區(qū)神經(jīng)細胞凋亡,該實驗證實,半暗帶區(qū)Caspase-3激活、神經(jīng)細胞凋亡是一個延遲發(fā)生的過程,為臨床應(yīng)用有效的治療藥物提供了寶貴的時間窗.4.