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文檔簡介
1、目的:本實(shí)驗(yàn)以脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)刺激造成血管內(nèi)皮細(xì)胞活化模型,觀察青心酮對(duì)活化內(nèi)皮細(xì)胞的Toll樣受體4(Tolllikereceptors4,TLR4)及其下游分子一一核因子一r,B(NF-r,B)、腫瘤壞死因子一α(TNF-a)表達(dá)的影響,探討青心酮治療子癇前期等病理性妊娠的藥理作用機(jī)制及TLR4信號(hào)系統(tǒng)在病理妊娠中的可能作用。 方法:本研究以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株ECV304為研究對(duì)象,用終
2、濃度為1μg/mLLPS誘導(dǎo)使其活化,以10一lmol/L,10-6mol/L和10-5mol/L青心酮對(duì)激活的細(xì)胞進(jìn)行干預(yù),分別用半定量逆轉(zhuǎn)錄.聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測TLR4mRNA的表達(dá),用免疫印跡法檢測TLR4、Ir.Bα的蛋白質(zhì)的表達(dá),并用ELISA法檢測上清液TNF-α的含量。實(shí)驗(yàn)分三部分進(jìn)行:1、研究青心酮對(duì)激活的血管內(nèi)皮細(xì)胞TLR4表達(dá)的影響;2、研究青心酮對(duì)激活的血管內(nèi)皮細(xì)胞11Bα蛋白含量的影響;3、研究青心
3、酮對(duì)激活的血管內(nèi)皮細(xì)胞TNF.Q分泌量的影響。 結(jié)果:(1)10—7mol/L,10一6mol/L和10一5mol/L青心酮可顯著減少LPS刺激的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ECV304TLR4mRNA和蛋白的表達(dá)量(P<0.05),并且呈一定劑量依賴性; (2)10—7mol/L,10一6mol/L和10一5mol/L青心酮能顯著抑制LPS誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ECV304IrBa蛋白的降解(P<0.05),即抑制NF-r~B的活
4、化。而1O-7mol/L青心酮干預(yù)組與l0'6mol/L青心酮干預(yù)組相比,Ir,Bα蛋白表達(dá)量無明顯差異(P>O.05);(3)10一7mol/L,10一6mol/L和10一5mol/L青心酮對(duì)LPS誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ECV304TNF-a分泌的具有顯著的抑制作用(P<0.05)。而10'Smol/L青心酮干預(yù)組與10-6mol/L青心酮干預(yù)組相比,ECV-304細(xì)胞TNF.Q分泌量無明顯差異(P>0.05)。 結(jié)論:青心酮
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