干擾DRAM1基因對肝癌HepG2細胞遷移侵襲能力的影響及與自噬之間關系研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討干擾DRAMl基因在體外對肝癌HepG2細胞迀移侵襲能力的影響,并對自噬與干擾DRAMl基因造成的細胞迀移侵襲能力的影響之間關系進行初步研究。
　　方法:選用人肝癌HepG2細胞進行試驗。脂質體Lipofectamine2000與化學合成雙鏈DRAMlsiRNAl/2混合,瞬時轉染干擾肝癌HepG2細胞DRAMl基因表達后48小時,Western blot檢測干擾DRAMl基因表達后DRAMl蛋白表達情況并檢測其干擾效率

2、;隨后,Western blot檢測上皮間質轉化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)相關標記蛋白表達情況;應用tmnswell小室檢測細胞迀移侵襲能力變化。為了進一步研究干擾DRAMl基因造成的細胞迀移侵襲能力的影響與自噬之間關系,干擾DRAMl基因表達后,用Western blot及細胞免疫熒光法檢測細胞內自噬相關蛋白水平變化;同上方法,利用化學合成的雙鏈ATG5 s i R N A,轉染干擾

3、肝癌HepG2細胞自噬相關基因ATG5表達后48小時,Western blot檢測ATG5蛋白表達情況并檢測其干擾效率;Western blot及細胞免疫熒光法檢測細胞內自噬相關蛋白水平變化;transwell小室檢測干擾ATG5基因表達抑制自噬后肝癌HepG2細胞迀移侵襲能力變化。
　　結果:干擾DRAMl基因表達后48小時,Western blot檢測顯示DRAMl siRNAl組和DRAMl siRNA2組DRAMl蛋白的表

4、達水平均明顯下調,干擾效率較高;隨后應用Western blot檢測干擾DRAMl基因表達后EMT相關標記蛋白表達變化顯示:E-cadherin蛋白表達上調,Vimentin及Snail蛋白表達下調;應用Transwell小室檢測各組細胞的迀移侵襲能力,實驗結果顯示,迀移和侵襲實驗透膜細胞數(shù)均明顯減少。干擾DRAMl基因表達后,利用Western Blot及細胞免疫熒光法檢測自噬相關蛋白表達變化顯示,LC3(LC3-II)蛋白表達下調,

5、P62蛋白表達上調。干擾ATG5基因表達后ATG5蛋白的表達水平明顯下調,進一步Western Blot及細胞免疫熒光法檢測自噬相關標記蛋白表達變化發(fā)現(xiàn),LC3(LC3-II)蛋白表達下調,P62蛋白表達上調,證明干擾ATG5后自噬被抑制,Tmnswell小室檢測結果顯示,干擾ATG5基因抑制自噬后,迀移和侵襲實驗透膜細胞數(shù)亦均明顯減少。以上各實驗結果經統(tǒng)計學分析均有統(tǒng)計學意義。
　　結論:干擾DRAMl基因表達能使肝癌HepG2

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