JNK通路介導TGF-β1調控角膜基質CTGF表達和創(chuàng)傷后瘢痕形成的作用研究.pdf

1、山東大學博士學位論文JNK通路介導TGF-β1調控角膜基質CTGF表達和創(chuàng)傷后瘢痕形成的作用研究姓名：常媛申請學位級別：博士專業(yè)：眼科學指導教師：吳欣怡20090510山東大學博士學位論文亂，形成瘢痕組織。正常的大鼠角膜基質中有極少量C T G Fm R N A 表達，少量T G F - Bl m R N A 表達。創(chuàng)傷后大鼠角膜基質中有大量的T G F - B1 及C T G F m R N A 表達，并在創(chuàng)傷早期開始顯著增加，傷后第

2、3 天時基本達到高峰，但T G F —B1 表達下降速度比C T G F 快，在創(chuàng)傷后2 周基本達到正常水平。外源性T G F —B1 及C T G F 刺激T H S F 細胞2 4 h 后，M T T 結果顯示T G F - B1 和C T G F 均能夠明顯促進T H S F 細胞增殖；用中和抗體封閉C T G F 后，T G F - B 1 和C T G F 誘導的細胞增殖均被明顯抑制；3 n g ／m lT G F - Bl

3、刺激T H S F 細胞2 4 h 后，與對照組相比，C T G F 、C o lI Q1 m R N A 和C T G F蛋白的表達增加，T G F - B1 可誘導T H S F 細胞中C T G F 、C o l I Q1 m R N A 和蛋白的表達；C T G F 中和抗體封閉后T G F - Bl 促進的I 型膠原表達受到明顯抑制。結論：T G F - B1 和C T G F 在角膜創(chuàng)傷后表達明顯增加，共同參與角膜基質創(chuàng)傷修

4、復、促進角膜瘢痕形成；T G F - B 1 通過調控C T G F 發(fā)揮作用，C T G F 是T G F —B1促角膜瘢痕形成的下游介質。關鍵詞：c 1 I G F ：T G F - B1 ；角膜；創(chuàng)傷第二部分：T G F - B1 調控角膜基質中C T G F 表達和瘢痕形成的信號通路研究目的：探討M A P K s 通路在T G F _ p 1 調控C T G F 表達促角膜瘢痕形成過程中的作用，尋求控制角膜瘢痕形成的靶點。材料

5、和方法：體外培養(yǎng)T H S F 細胞，分別用E R K 、P 3 8 、J N K 通路阻斷劑預處理后，T G F —Dl 刺激2 4 h ，收集細胞并檢測C T G Fm R N A 的表達。建立體內(nèi)大鼠角膜創(chuàng)傷模型，實驗組用J N K 通路阻斷劑S P 6 0 0 1 2 5 處理。模型建立前3 0 分鐘及建立后每天采用S P 6 0 0 1 2 5 ( 5 0 uM ) 結膜下注射，對照組用生理鹽水處理。裂隙燈每天觀察臨床改變，組

6、織切片H E 染色觀察角膜組織學改變。免疫組化檢測C T G F 、磷酸化J N K ( p h o s p h o r y l a t e d J N K ，嚴J N K ) 變化，熒光定量P C R 檢測T G F —B1 及C T G Fm R N A 的表達。培養(yǎng)T H S F 細胞，S P 6 0 0 1 2 5 阻斷J N K 通路后，再用T G F —B 1刺激T H S F 細胞，2 4 h 后M T T 法檢測細胞增殖