ω-3魚油改善腸外營養(yǎng)相關性肝病及其內質網(wǎng)應激機制的研究.pdf

1、目的：
　　 通過建立新生兔腸外營養(yǎng)相關性肝病(PNALD)模型，研究新生兔肝臟內質網(wǎng)應激相關標志蛋白-糖調節(jié)蛋白94(GRP94)的表達變化，探討GRP94在PNALD發(fā)病機制中的作用，并試圖揭示魚油改善PNALD的作用機制，為臨床預防和治療PNALD提供實驗依據(jù)。
　　 材料與方法：
　　 母乳喂養(yǎng)7日的新西蘭新生兔24只，雌雄不限，隨機分為3組，對照組(Control，CON組，n=8)、全胃腸外營養(yǎng)組（t

2、otalparenteralnutrition，TPN組，n=8）、ω-3魚油脂肪乳干預組(ω-3FishOilFatEmulsionIntervention，F(xiàn)O組，n=8）。TPN組給予全腸道外營養(yǎng)，經(jīng)頸靜脈置入硅膠管，持續(xù)輸注靜脈TPN營養(yǎng)液（配方組成詳見表1）一周；FO組（方法同TPN組）以ω-3魚油脂肪乳等量替代TPN營養(yǎng)液中的普通脂肪乳劑；CON組給予母乳喂養(yǎng)一周。飼養(yǎng)于恒溫暖箱，溫度維持在26～28℃之間，相對濕度40％～

3、60％，根據(jù)體重調節(jié)輸液量，按24oml.kg-1.d-1。造模結束后，檢測三組血清生化指標變化；取三組肝臟組織行病理切片檢測；采用半定量逆轉錄多聚酶鍵式反應法(RT-PCR)檢測三組肝臟組織中內質網(wǎng)應激相關標識蛋白—糖調節(jié)蛋白94(GRP94)mRNA的表達；另取三組肝臟組織采用免疫組織化學技術檢測肝臟組織中三組GRP94蛋白表達。
　　 結果：
　　 1.血清生化指標水平：TBIL、DBIL、γ-GT、ALB在三組間

4、比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，而TP、AL、ALP、TG、TC、PA水平在三組間無顯著性差異(P＞0.05)。與CON組比較，TPN組血清TBIL（50.25±3.06）μmol/Lvs（2.28±1.04）μmol/L、DBIL（47.28±3.91）μmol/Lvs（1.05±0.57）μmol/L、γ-GT（130.47±5.61）IU/Lvs（14.33±5.46）IU/L均明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)

5、，ALB(11.73±1.05)g/Lvs（26.86±2.83）g/L明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)；而FO組與CON組比較，血清TBIL(3.28±1.69)μmol/Lvs(2.28±1.04)μmol/L、DBIL(1.76±0.86)μmol/Lvs(1.05±0.57)μmol/L、γ-GT(14.33±5.45)IU/Lvs(11.28±5.68)IU/L、ALB(26.29±3.12)g/Lvs（26.86±

6、2.83）g/L均無明顯差異(P＞0.05)；與TPN組比較，F(xiàn)O組血清TBIL（3.28±1.69）μmol/Lvs(50.25±3.06)μmol/L、DBIL(1.76±0.86)μmol/Lvs(47.28±3.91)μmol/L、γ-GT（14.33±5.45）IU/Lvs（130.47±5.61）IU/L均明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)．ALB（26.29±3.12）g/Lvs（11.73±1.05）g/L明顯升

7、高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　 2．肝臟組織學變化：與CON組相比，TPN組肝臟組織可見肝細胞索結構紊亂，肝細胞彌漫脂肪空泡變性，門脈區(qū)可見大量炎性細胞浸潤，未見明顯膽管增生及膽汁淤積。而FO組肝細胞索形態(tài)正常，僅可見少量肝細胞脂肪變性，偶見炎性細胞浸潤，匯管區(qū)小葉間膽管無增生，膽管無擴張。
　　 3．內質網(wǎng)應激相關標志蛋白GRP94蛋白表達：免疫組織化學結果顯示，與CON組相比，TPN組肝臟組織GRP94

8、蛋白表達灰度值（133.838±13.664vs78.138±8.169）明顯升高(P＜0.01)，F(xiàn)0組肝臟組織GRP94蛋白表達灰度值（80.727±9.356vs78.138±8.169）與CON組比較無明顯差異(P＞0.05)，但與TPN組相比，F(xiàn)O組肝臟組織GRP94蛋白表達灰度值（80.727±9.356vs133.838±13.664）明顯降低(P＜0.01)。
　　 4．內質網(wǎng)應激相關標志蛋白GRP94mRNA表

9、達：RT-PCR結果顯示，與CON組相比，TPN組新生白兔肝臟組織GRP94mRNA表達灰度值（1.217±0.113vs0.614±0.034）明顯升高(P＜0.01)，F(xiàn)O組肝臟組織GRP94mRNA表達灰度值（0.661±0.117vs0.614±0.034）與CON組比較無明顯差異(P＞0.05)，但與TPN組相比，F(xiàn)O組肝臟組織GRP94mRNA表達灰度值（0.661±0.117vsl.217±0.113）明顯降低(P＜0.0