JAK2-STAT3通路在緩激肽后處理心肌保護作用中的機制研究.pdf

1、目的:心肌缺血再灌注損傷是缺血性心臟病以及心臟手術后心功能不全的主要病理基礎。尋找有效的心肌保護措施減輕心肌缺血再灌注損傷具有重要意義。雖然缺血預處理與后處理可以顯著減少再灌注后心肌梗死面積,心肌水腫及炎癥反應,但這些機械性保護措施在臨床應用上受到極大的限制。緩激肽后處理可以模擬缺血后處理發(fā)揮心肌保護作用,并且可以減少對主動脈的操作,減少并發(fā)癥,因而具有更廣闊的應用前景。緩激肽后處理心肌保護詳細機制目前不十分清楚。JAK-STAT途徑的

2、主要作用是將細胞外信號傳遞到細胞核,進而調節(jié)細胞核內轉錄引發(fā)生物學效應,并在心肌缺血再灌注損傷以及內源性心肌保護機制中具有重要作用。本課題在大鼠心肌缺血再灌注損傷模型下,以心肌梗死面積與心肌細胞凋亡為終點,觀察緩激肽后處理心肌保護作用。探討JAK2-STAT3通路在緩激肽后處理心肌保護機制中的作用。
　　 方法:建立大鼠心肌缺血再灌注損傷模型,將實驗大鼠隨機分成:(1)空白對照(sham)組:開胸后,左冠狀動脈前降支處穿線,不阻

3、斷血管,穿線后10min或120 min或24h取標本待檢測。(2)缺血再灌注(I-R)組:缺血30 min,再灌注10min或120min或24h取標本待檢測。(3)緩激肽后處理(BK)組:缺血30 min,再灌注10min或120 min或24h取標本待檢測,并于再灌注前給予緩激肽(200ug/kg)。(4)緩激肽后處理+AG490(BK+AG490)組:缺血30 min,再灌注10min或120 min或24h取標本待檢測,再灌注

4、前給予緩激肽(200ug/kg),并于再灌注前5 min靜脈注射AG490(3 mg/kg)。(5)緩激肽后處理+wortmannin(BK+wortmannin)組:缺血30 min,再灌注10min取標本待檢測,再灌注前給予緩激肽(200ug/kg),并于再灌注前5 min靜脈注射wortmannin(60ug/kg)。TTC染色法檢測再灌注2小時心肌梗死面積；TUNEL法檢測再灌注2小時及24小時心肌細胞凋亡水平:Western-

5、blot法檢測再灌注10分鐘磷酸化STAT3,磷酸化Akt水平反應JAK2-STAT3通路,P13K/Akt通路激活情況。
　　 結果:
　　 1.缺血再灌注長期損傷:Sham組未見明顯心肌細胞凋亡。I-R組再灌注24h細胞凋亡率明顯高于再灌注2h。
　　 2.緩激肽后處理的心肌保護作sham組未見明顯心肌梗死,各處理組AAR/LV差異無統(tǒng)計學意義。BK組再灌注2小時Infarct size/AAR低于I-R組、

6、BK+AG490組,差異有統(tǒng)計學意義,緩激肽后處理顯著減少再灌注2h及24h心肌細胞凋亡比率；各處理組再灌注24h較2h心肌細胞凋亡比率均顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義。
　　 3.JAK2-STAT3通路與緩激肽后處理心肌保護作用緩激肽后處理可以顯著上調再灌注10分鐘STAT3及Akt磷酸化水平,與I-R組相比差異有統(tǒng)計學意義。使用JAK2阻斷劑AG490后,緩激肽后處理的心肌保護作用消失。
　　 4.JAK2-STAT3

7、通路對P13K/Akt通路的影響使用JAK2阻斷劑AG490可以消除緩激肽后處理對Akt的磷酸化激活作用,與緩激肽后處理組相比差異有統(tǒng)計學意義；而使用P13K阻斷劑wortmannin不能消除緩激肽后處理對STAT3的磷酸化激活作用。
　　 結論:
　　 1.缺血再灌注存在長期損傷機制,心肌細胞凋亡是其損傷形式之一。
　　 2.緩激肽后處理可以顯著減少再灌注2小時心肌梗死面積及心肌細胞凋亡比率,再灌注24小時仍可